GCAC1809 – 1812TTCT: ein neuer prognostischer Biomarker für die chronische Hepatitis B Virus Infektion

Einleitung:

Als Biomarker für das Management der chronischen Hepatitis B Virus (HBV) Infektion sind v.a. die HBV DNA und das quantitative (q)HBsAg im klinischen Alltag fest etabliert. Virale Mutationen wie z.B. im basalen core promotor (BCP) wurden zwar mit der Entwicklung einer Leberzirrhose assoziiert, finden in der täglichen Praxis jedoch nur selten Anwendung.

Ziele:

Etablierung von Biomarkern für den Verlauf der chronischen HBV Infektion.

Methodik:

Sequenzierung der BCP Region in 560 Patienten mit HBeAg negativer chronischer HBV Infektion (Albatros-Studie) und in 125 Patienten mit HBV-assoziierter Leberzirrhose. Modeling pgRNA Sekundärstruktur. Expression von HBV Genomen mit A1762T/G1764A und GCAC1809 – 1812TTCT in Hepatomazellen und Analyse mittels Western Blot, HBc-/HBs-ELISA, Immunfluoreszenzmikroskopie und Northern Blot.

Ergebnis:

In den Patienten mit HBeAg negat. chronischer HBV Infektion wurde eine neue Vierfach-Mutation (GCAC1809 – 1812TTCT) in der sog. Kozak-Sequenz von Precore in 42% (233/560) der Patienten unabhängig vom Genotyp nachgewiesen. Diese Mutation ist hochsignifikant mit BCP-Doppelmutation A1762T/G1764A und mit niedriger HBV DNA assoziiert (p < 0,001). Die Berechnung der pgRNA prognostiziert eine Destabilisierung der RNA Sekundärstruktur durch A1762T/G1764A und eine Re-Stabilisierung durch GCAC1809 – 1812TTCT. In vitro Analysen zeigen eine verminderte RNA-Transkription durch GCAC1809 – 1812TTCT, die wiederum mit einer Reduktion von Core und HBsAg einhergeht. In der Kohorte mit HBV-assoziierter Leberzirrhose wurde GCAC1809 – 1812TTCT trotz hoher Prävalenz der BCP Doppelmutation (83%, 104/125) in keinem Patienten detektiert (0%; 0/125).

Schlussfolgerung:

Die Mutation GCAC1809 – 1812TTCT ist hochprävalent nachweisbar in Patienten mit HBeAg negat. chronischer HBV Infektion nicht jedoch in Patienten mit HBV-assoziierter Leberzirrhose. GCAC1809 – 1812TTCT agiert mutmaßlich als pgRNA-stabilisierende kompensatorische Mutation für die BCP-Doppelmutation A1762T/G1764A. In vitro zeigt sich eine verminderte transkriptionelle Aktivität, diese erklärt eine Assoziation mit niedriger HBV DNA in vivo. Unsere Ergebnisse schlagen GCAC1809 – 1812TTCT als neuen potenten prognostischen Biomarker für den natürlichen Verlauf der chronischen HBV Infektion vor.