Abstract
Background There are a variety of protocols for manufacturing autologous serum (AS) eye drops.
The Lucerne protocol for the production of AS eye drops uses a slightly reduced gravitational
(g)-force and time for the centrifugation process (2500 × g for 10 minutes), compared
to previously published optimised protocols, to obtain high levels of epitheliotropic
growth factors (3000 × g for 15 minutes). The goal of this study was to compare the
concentrations of growth factors, albumin and lysozyme in autologous serum eye drops
manufactured with these protocols.
Material and Methods Blood from 5 healthy volunteers was placed in plastic tubes without an anticoagulant.
Tubes from each donor were left in a vertical position for 2 hours at room temperature
to facilitate coagulation, followed by centrifugation at either 2500 × g for 10 minutes
or at 3000 × g for 15 minutes at room temperature. The serum levels of beta nerve
growth factor (β-NGF), transforming growth factor β1 (TGF-β1), epidermal growth factor
(EGF), hepatocyte growth factor (HGF), platelet-derived growth factor BB (PDGF-BB)
and vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) were measured in triplicate with
a multi-analyte Simple Plex platform. The Simple Plex cartridge allows each sample
to be run in triplicate for each analyte and prevents any interaction between the
antibody components for each biomarker. The serum level of albumin was measured by
turbidimetric immunoassay Tina-quant and of lysozyme by single radial immunodiffusion
assay.
Results For all analytes, the reduced g-force and centrifugation time did not result in a
significant difference in serum levels.
Conclusions The Lucerne protocol for the production of autologous serum eye drops with reduced
g-force and a shorter centrifugation time does not affect the concentrations of the
main epitheliotropic growth factors, albumin and lysozyme, in AS eye drops.
Zusammenfassung
Hintergrund Es gibt verschiedene Protokolle zur Herstellung von Eigenserum-Augentropfen. Das
Luzerner Protokoll zur Herstellung von Eigenserum-Augentropfen benutzt eine leicht
reduzierte Zentrifugierungskraft und eine kürzere Zeitspanne (2500 × g, 10 Minuten)
im Vergleich zu den früher publizierten optimierten Protokollen (3000 × g, 15 Minuten),
um epitheliotrope Wachstumsfaktoren zu erhalten. Ziel dieser Studie war es, die Konzentrationen
von Wachstumsfaktoren, Albumin und Lysozym in mit diesen Protokollen hergestellten
Eigenserum-Augentropfen zu vergleichen.
Material und Methoden Es wurden Plastikröhrchen mit Blutproben von 5 gesunden, freiwilligen Spendern ohne
Beigabe eines Antikoagulans gefüllt. Die Röhrchen wurden 2 Stunden lang senkrecht
bei Zimmertemperatur gehalten, um die Koagulation anzuregen. Danach wurden die Röhrchen
entweder 10 Minuten lang mit 2500 × g oder 15 Minuten lang mit 3000 × g bei Zimmertemperatur
zentrifugiert. Die Serumspiegel der Wachstumsfaktoren β-NGF, TGF-β1, EGF, HGF, PDGF-BB
und VEGF-A wurden mithilfe eines Simple-Plex-Systems für mehrere Analyten gemessen.
Mit der Simple-Plex-Patrone wird jede Blutprobe 3 × für jeden Analyten getestet, und
es kommt zu keiner Interaktion zwischen den Antikörperkomponenten der jeweiligen Biomarkern.
Der Albuminserumspiegel wurde mit dem Tina-quant-Immunoassay und der Lysozymserumspiegel
mit einem radialen Einfachimmundiffusionstest gemessen.
Ergebnisse Die Reduzierung der Zentrifugierungskraft und -zeit führte zu keinem signifikanten
Unterschied der Konzentrationen der Analyten im Serumspiegel.
Schlussfolgerungen Die Konzentration der wichtigsten epitheliotropen Wachstumsfaktoren sowie von Albumin
und Lysozym in den mit Luzerner Protokoll hergestellten Eigenserum-Augentropfen bleibt
unverändert hoch.
Key words
Lucerne protocol - autologous serum eye drops - production protocol - centrifugation
- growth factors
Schlüsselwörter
Luzerner Protokoll - Eigenserum-Augentropfen - Herstellungsprotokoll - Zentrifugierung
- Wachstumsfaktoren
