Z Gastroenterol 2009; 47 - P121
DOI: 10.1055/s-0029-1241372

Das Hepatitis C Nichtstrukturprotein 2 ist ein zusätzlicher Angriffspunkt für die durch Ciclosporin A vermittelte Hemmung der HCV RNA Replikation

S Ciesek 1, 2, E Steinmann 2, MP Manns 1, N Tautz 3, H Wedemeyer 1, T Pietschmann 2
  • 1Medizinische Hochschule Hannover, Gastroenterologie, Hepatologie und Endokrinologie, Hannover, Germany
  • 2Twincore, Experimentelle Virologie, Hannover, Germany
  • 3Universität Lübeck, Department of Medical Molecular Biology, Lübeck, Germany

Einleitung: Die Hepatitis C Virus (HCV) Infektion ist mit weltweit ca. 130 Millionen Virusträgern eine der meist verbreiteten Infektionskrankheiten. Kürzlich konnte mithilfe eines klassischen HCV-Replikons gezeigt werden, dass die HCV NS5B Polymerase durch Ciclosporin A (CsA) über eine Interaktion mit Cyclophilinen gehemmt werden kann. Da die verwendeten HCV-Replikons jedoch nicht die HCV Proteine Core, E1, E2, p7 und NS2 enthalten, ist unklar, ob die Funktion dieser Proteine ebenfalls durch CsA beinflusst werden kann.

Ziele: Untersuchung des CsA- Effekts auf den kompletten HCV Replikationszyklus (Infektiösität, Replikation und Freisetzung) unter Verwendung des JFH1-basierten Zellkulturmodells.

Methodik: Hoch permissive Huh7 Zellen wurden mittels Elektroporation mit verschiedenen Luciferase Reporter Genomen transfiziert, die entweder das komplette HCV Genom enthielten oder in denen jeweils ein HCV Protein deletiert worden war. Nach 4 Stunden wurden verschiedene Konzentrationen CsA zum Medium hinzugegeben. Die HCV RNA Replikation wurde durch die Luciferaseaktivität bestimmt. Der Knockdown von Cyclophilinen erfolgte mithilfe von spezifischen siRNAs durch Transfektion.

Ergebisse: Zunächst fiel ein ca. 10-fach effizienteres Ansprechen von CsA auf HCV Volle-Länge-Genome (Jc1 oder JFH1) im Vergleich zu subgenomischen Replikons auf. Durch Deletion einzelner Virusproteine konnte gezeigt werden, dass dieses effizientere Ansprechen auf CsA unabhängig von Core, E1, E2 und p7 ist. Durch die Testung eines NS2–5B Replikons wurde NS2 als ein neues Zielprotein für die CsA-vermittelte Inhibition der HCV RNA Replikation identifiziert. Mithilfe von spezifischen gegen Cyclophilin B gerichtete siRNAs wurden Zellen mit verringerter Expression von Cyclophilin B hergestellt. In diesen Zellen war die HCV RNA Replikation nur im Kontext vom NS2–5B Replikon, nicht jedoch im NS3–5B Replikon um etwa 2 Log vermindert.

Schlussfolgerung: NS2 ist ein weiterer Angriffspunkt für die CsA-vermittelte Hemmung der HCV RNA Replikation. Die Funktion des HCV Nichtstrukturprotein 2 scheint von dem zellulären Protein Cyclophilin B abhängig zu sein.