Expression von Fettsäuretransport-Proteinen und Death-Rezeptoren in humanen primären Hepatozyten nach der Behandlung mit freien Fettsäuren (FFA)

Einleitung: Die Ansammlung von Lipidtröpfchen in Hepatozyten bei der nicht -alkoholischen Fettleber Erkrankung (NAFLD) bedingt eine erhöhte Death-Rezeptor- Expression, sowie eine Erhöhung der Apoptoserate, Leberschädigung und der Leberfibrose. Allerdings ist noch immer unklar, wie die Fettsäuren die Plasmamembran der Hepatozyten passieren und zur Death-Rezeptor -Expression beitragen.

Ziele: Untersuchungen zur Expression von Fettsäuretransport-Proteinen in steatotischen Hepatozyten soll die Transport-Prozesse von freien Fettsäuren näher aufklären. Weiterhin wird der Effekt einer Ansammlung von Lipiden in den Hepatozyten im Zusammenhang mit der Expression von Death-Rezeptoren und der Aktivierung der Apoptose untersucht.

Methodik: Humane Hepatozyten wurden für 24–96h mit 0,5mM und 1mM freien Fettsäuren (FFA=free fatty acids) inkubiert. Die Expression von FABP-1, FATP-5, CD36/FAT und Caveolin-1, der Death-Rezeptoren DR4, DR5, CD95/Fas und TNFR1, sowie der Apoptose-relevanten Moleküle NOXA und cFLIPL wurde durch quantitative real-time PCR ermittelt. Das Apoptose-Maß wurde durch einen M30 ELISA gemessen.

Ergebnis: Die Expression von CD36 (0,5±0,1;p=0,00001; Mittelwert±SEM) und Caveolin-1 (0,5±0,1;p=0,00001) war 96h nach Behandlung mit 1mM FFA reduziert, die FABP-1-Expression war nach 48h mit 1mM FFA erhöht (2,2±0,2;p=0,0004). Das Expressionslevel von FATP-5 war nach FFA-Behandlung nicht signifikant verändert. Die FFA-Inkubation für 96h führte zur verminderten Expression von DR4 (0,7±0,1;p=0,014) und DR5 (0,6±0,1;p=0,011). Die Expression von CD95/Fas (2,7±0,1 nach 96h,p=0,041) und TNFR1 (2,1±0,1 nach 24h,p=0,0002) wurde durch Behandlung mit 0,5mM FFA erhöht. Nach FFA-Behandlung wurde die Apoptose-Induktion (M30) nicht signifikant verändert, die Expression des pro-apoptotischen Moleküls NOXA (0,4±0,1 nach 96h;p=0,0001) gesenkt. Die Expression des anti-apoptotischen Moleküls cFLIPL wurde durch die Behandlung mit FFA aktiviert (2,9±0,5 nach 72h;p=0,017).

Schlussfolgerung: Die Behandlung mit FFA erhöht die Expression von FABP-1, foglich handelt es sich bei der FFA-Aufnahme um einen aktiven Prozess. Die FFA-Inkubation aktiviert die CD95- und TNFR1-Expression ohne dabei die Apoptoserate zu beeinflussen, was auf die Aktivierung von cFLIPL zurückzuführen ist.