IKKα reguliert E-Cadherin in einem TGFβ-abhängigen Modell der EMT von Pankreaskarzinomzellen

Einleitung: 90% der Patienten mit soliden Tumoren versterben an Metastasen. Aufgrund der hohen Rezidivrate nach Resektion ist beim Pankreaskarzinom von einer mikrometastatischen Erkrankung auszugehen. Eine Voraussetzung der Metastasierung ist die Differenzierung einer sessilen, im epithelialen Verbund integrierten Zelle hin zu einer motilen und invasiven Zelle. Dieser Differenzierungsvorgang wird als epitheliale-mesenchymale Transition (EMT) bezeichnet und spielt eine wichtige Rolle bei der Metastasierung. Ein initialer Schritt der EMT ist die Herunterregulation des „Adherens Junction“ Proteins E-Cadherin. Der IKK-NF-κB-Signalweg ist in Pankreaskarzinomen aktiv und reguliert Proliferation und Apoptoseresistenz. Der Beitrag des IKK-NF-κB-Signalweges zur EMT von Pankreaskarzinomzellen ist bisher nicht untersucht.

Ziel: Ziel der Arbeit ist es, den Beitrag des IKK-NF-κB-Signalweges zur EMT von Pankreaskarzinomzellen zu charakterisieren.

Methodik: Zur Analyse der EMT wurde ein TGFβ-abhängiges Panc1 Pankreaskarzinommodell verwendet. Der IKK-NF-κB-Signalweg wurde mit IKKα-, IKKβ-, RelA/p65-, c-Rel- und RelB-spezifischen siRNAs untersucht. Expressionsanalysen wurden mit Westernblot und mittels quantitativer RT-PCR durchgeführt. Zur Detektion von DNA-Bindung wurden Avidin-Biotin-Complex DNA-(ABCD)-Assays durchgeführt. Transkriptionelle Aktivität von Promotoren wurde im Reportergenassay bestimmt.

Ergebnisse: Während die Faktoren des IKK-NF-κB-Signalweges IKKβ, RelA/p65, c-Rel und RelB keinen Einfluss auf die EMT von TGFβ-behandelten Panc1 Zellen haben, ist IKKα essentiell an der TGFβ-abhängige Herunterregulation von E-Cadherin beteiligt. Ein NF-κB Luciferase Reportergen lässt sich durch TGFβ in Panc1 Zellen nicht aktivieren, was auf einen NF-κB unabhängige Funktion der IKKα Untereinheit hinweist. Im Gegensatz zum NF-κB Reportergen lässt sich durch TGFβ Behandlung ein SMAD Reportergen IKKα-abhängig aktivieren. Depletion von IKKα verhindert die Bindung eines SMAD3/SMAD4 Komplexes an ein SMAD Konsensus Oligonukleotid im ABCD Assay. Weiterhin hängt die TGFβ-bedingte Induktion der E-Cadherin Repressoren Snail und Slug vom IKKα-SMAD-Signalweg ab.

Schlussfolgerung: Ein neuer TGFβ-IKKα-SMAD Signalweg trägt zur Regulation von E-Cadherin und der EMT im Panc1 Modell bei.