Z Gastroenterol 2009; 47 - P374
DOI: 10.1055/s-0029-1241620

Der Pandeacetylasehemmer Panobinostat hemmt die Expression des onkogenen nukleären Proteins HMGA2 durch Induktion der miRNA let-7b im hepatozellulären Karzinom

P Di Fazio 1, R Schneider-Stock 2, D Neureiter 3, B Alinger 3, S Gahr 1, T Wissniowski 1, K Quint 1, M Ocker 1
  • 1Universitätsklinikum Erlangen, Medizinische Klinik 1, Erlangen, Germany
  • 2Universitätsklinikum Erlangen, Institut für Pathologie, Erlangen, Germany
  • 3Salzburger Landeskliniken, Institut für Pathologie, Salzburg, Austria

Hintergrund: Deacetylasehemmer sind ein neues Prinzip in der onkologischen Therapie. Neben der Kontrolle der Transkription durch Hemmung der Histondeacetylasen, wird eine Vielzahl weiterer zellulärer Prozesse beeinflusst. Der Pandeacetylasehemmer Panobinostat induziert alternative Apoptosewege und hemmt das Wachstum hepatozellulärer Karzinomzellen in vitro und in vivo, u.a. über eine p53-abhängige Induktion der Tumorsuppressor-miRNA let-7b. Die funktionelle Bedeutung von let-7b und dadurch regulierter Zielgene wurde nun näher charakterisiert. High mobility group A2 ist ein nukleäres Nicht-Histon-Protein, das in malignen Tumoren überexprimiert wird und mit Prognose, Überleben und Metastasierung korreliert ist.

Methoden: HepG2 (p53wt) und Hep3B (p53null) wurden mit 0,1µM Panobinostat (Novartis GmbH, Nürnberg) inkubiert. Ein Xenotransplantationsmodell mit HepG2-Zellen wurde in NMRI-Mäusen mit 10mg/kg KG behandelt. Die Expression der miRNA let-7b wurde mittels miScript in der quantitativen RT-PCR bestimmt, die Expression von let-7b–Zielgenen (myc, met, HMGA2, CDK4, CDK6, Rb1) durch quantitative RT-PCR, Westernblot und Immunhistologie. Die translationale Kontrolle wurde durch Koinkubation mit Cycloheximid und durch Transfektion einer zu let-7b antagonistischen miRNA verifiziert.

Ergebnisse: Panobinostat induziert die Expression von let-7b, insbesondere in p53wt HepG2. Parallel dazu wurden die Zielgene met und HMGA2 in HepG2 signifikant supprimiert, während in Hep3B keine Veränderungen beobachtet wurden. Die Immunzytochemie in vitro und die Analyse der Xenografts zeigte eine verminderte Expression des nukleären Proteins HMGA2. Die Hemmung der Translation durch Cyclohexmid bestätigte die posttranskriptionelle Kontrolle durch let-7b. Die Antagonisierung von let-7b und die Transfektion einer synthetischen let-7b miRNA in Hep3B bestätigte die Regulation der Expression von HMGA2 durch let-7b.

Schlussfolgerung: HMGA2 ist ein Zielprotein der Tumorsuppressor miRNA let-7b. Panobinostat kann in Abhängigkeit von p53 die Expression dieses onkogenen Proteins durch Induktion von let-7b posttranskriptionell hemmen und somit den malignen Phänotyp in HCCs beeinflussen. HMGA2 könnte damit ein neuer Biomarker für das Therapieansprechen im HCC sein.