Die Interaktion von CK18 und ZAP90 in der Retinolsäure-induzierten Apoptose bei Hepatozellulären Karzinomzelllinien

Die eingeschränkten therapeutischen Möglichkeiten für Patienten mit fortgeschrittenem hepatozellulärem Karzinom (HCC) machen die Entwicklung neuer Behandlungsstrategien erforderlich. In der Rezidivprophylaxe des HCC sind Retinoide wirksame Substanzen. Die durch die Retinolsäure induzierten molekularen, Transkriptionsfaktor unabhängigen, Mechanismen sind jedoch noch nicht vollständig aufgeklärt. In der vorliegenden Arbeit werden die Signaltransduktionskaskaden der Retinolsäure vermittelten Apoptose bei hepatozelluären Karzinomzellinien charakterisiert und die Interaktion mit dem proliferationsassoziierten Protein ZAP90 untersucht.Die molekularen Mechanismen wurden mit Hilfe von Western-Blots, siRNA-Assays, der Immunfluoreszenz und Etablierung eines monoklonalen ZAP90 Antikörpers charakterisiert.Die eingesetzten Retinoide (all-trans und 9-cis Retinolsäure) induzierten in den untersuchten Karzinomzelllinien unabhängig von der Retinolsäure-vermittelten Genregulation, dem p53-Mutationsstatus und dem Fas-Rezeptorstatus die Caspase vermittelte Apoptose. Von zentraler Bedeutung ist dabei die Hemmung der AKT vermittelten Signaltransduktionskaskaden. Neben PARP ist auch eine Spaltung von CK18 nachweisbar. Zusätzlich konnte erstmalig eine Interaktion von CK18-Fragmenten mit ZAP90 dargestellt werden.Die Retinolsäure induzierte Apoptose führt über die Inhibition des AKT Survival-Pathways zu einer Spaltung von CK18 und Interaktion mit ZAP90. Die Proteinstrukturmotive des ZAP90 (PH-Domäne, GTPase-Motiv) weisen auf eine funktionelle Interaktion mit der AKT-Signaltransduktionskaskade hin. Das Vorkommen von CK18/ZAP90 Komplexen in Kombination mit der Entwicklung des monklonalen ZAP90-AK könnte zudem die Basis für eine in-vivo Apoptose Diagnostik darstellen.

Antikörper - Apoptose-Marker - Diagnostik - Tumortherapie