Z Gastroenterol 2011; 49 - P350
DOI: 10.1055/s-0031-1285620

Multizelluläre Tumor Spheroide – Ein Modellsystem zur Untersuchung der CD95 Liganden-induzierten Apoptose von HBV-infizierten Hepatozyten

N Joschko 1, A Lovas 1, N Steinebrunner 1, LA Sun 1, W Stremmel 1, M Müller 1
  • 1Universitätsklinikum Heidelberg, Innere Medizin IV, Gastroenterologie, Infektionskrankheiten und Vergiftungen, Heidelberg, Germany

Multizelluläre Tumor Spheroide (MCTS) stellen ein gut etabliertes 3-D in vitro Modellsystem dar, welches die pathophysiologische in vivo Situation in Tumormikroregionen simuliert. Insbesondere ist es mithilfe von MCTS möglich Tumor-, Immunzell-Interaktionen zu analysieren. Eine akute Hepatitis-B-Virus (HBV)-Infektion ist durch eine starke, multispezifische CD8+ T-Zellantwort gekennzeichnet. Der genaue molekulare Mechanismus der T-Zell vermittelten Immunantwort ist noch nicht vollständig geklärt. Wir konnten bisher zeigen, dass ein intaktes CD95-Apoptose-System essentiell für die Elimination HBV-infizierter Hepatozyten ist. Ziel dieser Arbeit war es, die CD95-vermittelte Apoptose von HBV-infizierten Leberzellen durch CD95 Liganden-exprimierende Lymphozyten näher zu charakterisieren.

MCTS aus Hep3B Zellen wurden mit adenoviralen replikationsfähigen HBV-Konstrukten sowie adenoviralen p53 Konstrukten (AdHBV X-, AdHBVL-, AdHBVwt und Adp53) infiziert. HBV-infizierte MCTS wurden mit den Überständen (SNJ16) von CD95 Liganden-exprimierenden Lymphozyten (Jurkat J16) behandelt. Die Proliferation der Spheroide wurde über einen Zeitraum von 14 Tagen mikroskopisch dokumentiert und anschließend mithilfe der Zeiss Axio Vision Release Software quantifiziert.

Adenoviraler Transfer rekombinanter HBV-Konstrukte führte zur Inhibition der Proliferation und zur Apoptose-Induktion von MCTS. Während die Behandlung von MCTS mit den Überständen CD95 Liganden-exprimierender Lymphozyten lediglich zu einer verminderten Migration der Hepatozyten aus dem Spheroid führte, löste die Behandlung von HBV-infizierten Hepatozyten mit SNJ16 Apoptose aus. Dieser Effekt wurde durch die zusätzliche Infektion mit p53 verstärkt.

Mithilfe von MCTS haben wir die Interaktion von HBV-infizierten Hepatozyten mit Lymphozyten charakterisiert und gezeigt, dass CD95 Liganden-exprimierende Lymphozyten CD95-mediierte Apoptose von HBV-infizierten Hepatozyten auslösen können.