Z Gastroenterol 2011; 49 - P362
DOI: 10.1055/s-0031-1285633

p8 knock-out induziert ROS

T Bielow 1, S Weis 1, J Mössner 1, A Hoffmeister 1
  • 1Uniklinik Leipzig, Abteilung für Gastroenterologie/Rheumatologie, Leipzig, Germany

Einleitung: Das Protein p8 wurde aufgrund seiner Expression während der akuten Pankreatitis entdeckt. Trotz einer Reihe von Studien sind die Aufgaben des Proteins in der Zelle bisher nur wenig bekannt. Es scheint als Transkriptionskofaktor den Zellzyklus zu beeinflussen. Außerdem führt seine Expression zu einem milderen Verlauf der akuten Pankreatitis. Eigene und fremde Voruntersuchungen haben gezeigt, dass ein Mangel an p8 das anti-oxidative Enzym Hämoxygenase (HO)-1 induziert. Des Weiteren ist bekannt, dass Reactive oxygen species (ROS) an der Entstehung der akuten Pankreatitis und an der Induktion der HO-1 beteiligt sind.

Ziel der Arbeit: Zu klären, inwiefern die vermittelten p8 Effekte über eine Veränderung des Redoxstatus der Zelle hervorgerufen werden.

Methoden und Materialien: Semiquantitative RT-PCR (LightCycler®, Roche) und Western Blot Analysen von Embryonalen Fibroblasten (MEF) aus p8 knock- out (-/-) und Kontrollmäusen (p8+/+). Zellzyklusarrest mit Nocodazol sowie Verifizierung durch FACS-Analysen. ROS-Messung mit CM-H2DCFDA.

Ergebnisse: p8-/- MEF zeigen unstimuliert und nach Stimulation der HO-1 mit Cadmiumchlorid und Hämin einen signifikant (p<0,05)höheren Gehalt an HO-1 im Vergleich zu p8+/+ MEF. Auch nach Arretierung des Zellzyklus mit Nocodazol blieben diese Unterschiede bestehen. Darüber hinaus haben p8-/--MEF im Unterschied zu den p8+/+ MEF unstimuliert und nach H2O2 Stimulation einen erhöhten Gehalt an ROS. Dies war unter Gabe des Antioxidans N-Acetylcystein nur partiell reversibel. Die Produktion der ROS wird nicht durch die GTPase RAC-1 vermittelt und ist somit unabhängig von der membranständigen NADPH-Oxidase.

Diskussion: Unsere Untersuchungen zeigen, dass p8-/- MEF einen erhöhten Gehalt an ROS und HO-1 haben. Wir vermuten, dass der durch ROS veränderte Redoxstatus zur Induktion von HO-1 führt. Diese Veränderungen waren unabhängig vom Zellzyklus. Wir spekulieren, dass die bekannten zellulären Wachstumsunterschiede sowie die schwereren Verläufe der Pankreatitis in p8-/- Mäusen durch den erhöhten Gehalt an ROS und der damit verbundenen Abschwächung der anti-oxidativen Kapazität hervorgerufen wird. Die Quelle der vermehrten ROS bleibt zu ermitteln.

Die Arbeiten wurden durch das Formel 1 Projekt der Med. Fakultät gefördert.