Isolation and Quantification of Chitin-binding Mistletoe Lectin from Mistletoe Extracts and Validation of this Method

Summary

A method was established to isolate and quantify small amounts of chitin-binding mistletoe lectin (cbML) from extracts of the mistletoe (Viscum album L.) by affinity and reverse phase high performance liquid chromatography. A validation, according to ICH guidelines, of this analytical method was carried out and showed that specificity, robustness and precision are guaranteed. In addition, linearity is ensured for a content between 0.6 and 4.1 µg/ml of cbML in the extracts and recovery was calculated to be in the range of 94 to 100 %. So, accuracy of the method is guaranteed as well. As far as the range of the analytical method is concerned, a minimum of 1.2 µg and a maximum of 8.2 µg cbML can be incubated with the affinity material. Detection and quantitation limits were calculated to be 0.13 and 0.46 µg/ml cbML, respectively.

Zusammenfassung

Isolierung und Quantifizierung von Chitin-bindendem Mistellektin aus Mistelextrakten und Validierung dieser Methode

Es wurde eine Methode etabliert, mit der kleine Mengen von Chitin-bindendem Mistellektin (cbML) aus Mistelextrakten (Viscum album L.) durch Affini-täts- und Umkehrphasen-Hochdruckflüs-sigchromatographie isoliert werden können. Eine Validierung, dieser Methode gemäß den ICH-Richtlinien wurde durchgeführt, und es konnte gezeigt werden, daß Spezifität, Robustheit und Präzision gewährleistet sind. Außerdem ist eine Li-nearität zwischen 0,6 und 4,1 µg/ml cbML-Gehalt in den Extrakten gesichert. Die Wiederfindungrate beträgt zwischen 94 und 100 %. Damit ist die Richtigkeit der Methode ebenfalls gewährleistet. Was den Arbeitsbereich der Analysenmethode betrifft, so können minimal 1,2 µig und maximal 8,2 µg cbML mit dem Affinitätsmaterial inkubiert werden. Die Nachweis- und Bestimmungsgrenze beträgt 0,13 bzw. 0,46 Hg/ml cbML.

Key words

Mistletoe extracts - Mistletoe lectin, chitin-binding, isolation and quantification