Determination of Trimebutine and Desmethyl-trimebutine in Human Plasma by HPLC

Summary

A simple and sensitive HPLC method has been developed to measure trimebutine (CAS 39133-31-8, maleate: CAS 34140-59-5) and its main metabolite desmethyl-trimebutine in human plasma. The method was validated according to the Washington Consensus Conference on the Validation of Analytical Methods. It involved extraction of the plasma with n-hexane containing 2-pentanol, followed by reversed-phase HPLC using a Partisil^® ODS2 10 μm column and UV detection at 265 nm. The retention times of the internal standard (procaine), desmethyl-trimebutine and trimebutine were 2.4, 4.3 and 6.5 min, respectively. The standard curves were linear from 20 ng · ml⁻¹ (limit of quantitation) to 5000 ng · ml⁻¹ for both compounds. The coefficient of variation for all the criteria of validation were less than 15%. The extraction recoveries obtained for trimebutine and desmethyl-trimebutine were about 90%. Both compounds were very stable upon storage in plasma. The method was tested by measuring the plasma concentrations following oral administration to humans during a bioequivalence study and was shown suitable for pharmacokinetic studies.

Zusammenfassung

Bestimmung von Trimebutin und Desmethyl-Trimebutin in menschlichem Plasma mittels HPLC

Eine einfache und empfindliche HPLC-Methode wurde zur Bestimmung von Trimebutin (CAS 39133-31-8, Maleat: CAS 34140-59-5) und seinem hauptsächlichen Metaboliten Desmethyl-trimebutine in menschlichem Plasma entwickelt. Die Methode wurde gemäß der Washington Concensus Conference über die Validierung von analytischen Methoden validiert. Darin einbezogen war ein Plasma-Auszug mit n-Hexan mit 2-Pentanol, gefolgt von Umkehrphasen-HPLC unter Verwendung einer Partisil^® ODS2 10 μm Säule mit UV-Detektion bei 265 nm. Die Retentionszeiten des inneren Standards (Procain), von Desmethyl-trimebutin und Trimebutin betrugen 2,4, 4,3 und 6,5 min. Die Standardkurven waren linear von 20 ng · ml⁻¹ (quantitative Bestimmungsgrenze) bis 5000 ng · ml⁻¹ für beide Verbindungen. Der Variabilitätskoeffizient für alle Validierungskriterien war niedriger als 15%. Die Wiederfindungswerte für Trimebutin und Desmethyl-trimebutin lagen bei ungefähr 90%. Beide Verbindungen waren bei der Plasma-Lagerung sehr stabil. Die Methode wurde durch die Messung von Plasma-Konzentrationen nach oraler Gabe an Menschen im Verlauf einer Bioäquivalenzstudie getestet und erwies sich als zuverlässig für pharmakokinetische Studien.

Key words

CAS 34140-59-5 - CAS 39133-31-8 - Desmethyl-trimebutine, determination in plasma, HPLC - Trimebutine, determination in plasma, HPLC