Z Gastroenterol 2018; 56(01): E2-E89
DOI: 10.1055/s-0037-1612878
Poster Visit Session V Viral Hepatitis and Immunology – Saturday, January 27, 2018, 11:00am – 11:45am, Foyer area East Wing
Georg Thieme Verlag KG Stuttgart · New York

Identifizierung der bindenden Peptidsequenz von Zytokeratin 18 an das große Hepatitis-B-Oberflächenprotein

A Huhn
1   Justus-Liebig-Universität, Gastroenterologie, Gießen
,
Y Churin
1   Justus-Liebig-Universität, Gastroenterologie, Gießen
,
D Glebe
2   Justus-Liebig-Universität, Institut für Medizinische Virologie, Gießen
,
T Eckert
3   Justus-Liebig-Universität, Institut für Biochemie und Endokrinologie, Veterinärmedizinische Fakultät, Gießen
,
D Schröder
1   Justus-Liebig-Universität, Gastroenterologie, Gießen
,
M Roderfeld
1   Justus-Liebig-Universität, Gastroenterologie, Gießen
,
E Roeb
1   Justus-Liebig-Universität, Gastroenterologie, Gießen
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Publication History

Publication Date:
03 January 2018 (online)

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Einleitung:

Zytokeratin 18 (CK18) ist ein Intermediärfilamentprotein, das in einschichtigen Epithelzellen wie z.B. Hepatozyten exprimiert wird. CK18 ist bei Apoptose, Zellwachstum, Schutz vor zytotoxischen Einflüssen sowie an der Positionierung von Organellen und Proteinen in der Zelle (z.B. Membranproteinen) beteiligt. Einige Zytokeratine gehen in den Wirtszellen Interaktionen mit Bakterien, Viren und Parasiten ein und zeigen einen direkten Einfluss auf Infektion, Replikation und Freisetzung von Pathogenen aus den Wirtszellen.

Ziele:

Oberflächenproteine des Hepatitis-B-Virus (HBV) können schwere Leberschädigungen mit Hepatozytenuntergang, sekundäre Entzündungsprozesse und Hepatokarzinogenese hervorrufen (Chisari 1987, 1989). Die Akkumulation und Aggregation des großen Hepatitis-B-Oberflächenproteins (LHBs) im Endoplasmatischen Retikulum führt zu ER-Stress und Apoptose der betroffenen Hepatozyten. Unser Ziel ist der Nachweis einer Interaktion von CK18 und LHBs sowie die Identifizierung der LHBs-bindenden Peptidsequenz von CK18.

Methodik:

In der stabil LHBs-exprimierenden Hepatozyten-Zelllinie Huh7 wurde die Interaktion von CK18 mit LHBs mittels Co-Immunpräzipitation analysiert. Vier überlappende CK18 Teilpeptide wurden in den Expressionsvektor c-Flag-pcDNA3 kloniert und in die stabil LHBs-exprimierende Fibroblasten-Zelllinie NIH3T3 transfiziert. Die Interaktion von CK18-Peptiden und LHBs wurde mittels Co-Immunpräzipitation detektiert und mittels Western Blot ausgewertet. Die bindende Peptidsequenz von CK18 mit LHBs wurde mittels Molekulardynamik-Simulation untersucht.

Ergebnis:

Co-Immunpräzipitationen zeigten eine Interaktion zwischen CK18 und LHBs in Zellkultur. Die LHBs-bindende Peptidsequenz von CK18 wurde im Bereich zwischen den Aminosäuren 87 und 192 identifiziert.

Schlussfolgerung:

Mit der Identifizierung der LHBs-bindenden Peptidsequenz von CK18 könnte die therapeutische Verwendbarkeit dieser Peptide untersucht werden. Unsere Ergebnisse tragen zum besseren Verständnis der zellulären Pathophysiologie von HBV-Oberflächenproteinen bei.

Literatur:

[1] Chisari, F.V., Filippi, P., Buras, J., McLachlan, A., Popper, H., Pinkert, C.A., Palmiter, R.D., and Brinster, R.L. (1987). Structural and pathological effects of synthesis of hepatitis B virus large envelope polypeptide in transgenic mice. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 84, 6909 – 6913.

[2] Chisari, F.V., Klopchin, K., Moriyama, T., Pasquinelli, C., Dunsford, H.A., Sell, S., Pinkert, C.A., Brinster, R.L., and Palmiter, R.D. (1989). Molecular pathogenesis of hepatocellular carcinoma in hepatitis B virus transgenic mice. Cell 59, 1145 – 1156.