Zusammenfassung
Hintergrund Das biologische Verhalten von Iriszellen wurde in vitro bisher nicht abschließend
erforscht. Zur genaueren Untersuchung der Kultivierungsfähigkeit von Iriszellen
in vitro isolierten wir aus humanen Augen gewonnenes Irispigmentepithelium (IPE)
und Irisfibroblasten.
Material und Methoden Zu diesem Untersuchungszweck wurden aus 19 Augenspenden Iriszellen isoliert.
Die durch Pipette abgesaugten und isolierten IPE-Zellen wurden mittels Fibronectinbeschichtung
und Anwendung eines besonderen Zellkulturmediums kultiviert. Außerdem wurde eine
Methode zur Selektion der Fibroblasten aus Irisstroma (IS) in vitro im Wege der
Fibronectinbeschichtung, Passagierung und Proliferierung in Zellkulturmedium entwickelt.
Ergebnisse Die IPE- und IS-Zellen konnten aus sämtlichen Entnahmen erfolgreich kultiviert
werden. Die IPE-Zellen begannen im Durchschnitt nach 5,4 ± 0,7 Tagen in Kultur
sich zu teilen. Die Teilung der IS-Zellen wurde im Durchschnitt nach 3,3 ±
0,87 Tagen in Kultur beobachtet. Ein konfluenter Zellrasen wurde bei IPE-Zellen
nach 14,7 ± 4,92 Tagen und bei IS-Zellen nach 8,1 ± 1,45 Tagen erreicht. Die
immunzytochemische Färbung mittels zweier Antikörper gegen Zytokeratin und einem
Antikörper gegen humane Fibroblasten zeigte, dass es sich um eine reine IPE-Kultur
handelte, und dass die IS-Kultur aus Fibroblasten bestand. Die elektronenmikroskopischen
Aufnahmen der IPE- und IS-Kultur bestätigten die Ergebnisse der immunzytochemischen
Färbung.
Schlussfolgerungen Die Isolierung und Kultivierung in vitro von aus Augenspenden gewonnenen IPE-Zellen
und IS-Zellen lässt sich erfolgreich durchführen. Die kultivierten Zellen stellen
ein geeignetes Modell für die In-vitro-Erforschung der Iris dar. Als Anwendungsfelder
kommen Untersuchungen des Stoffwechsels der Iris oder von Erkrankungen der Iris
in Betracht.
Background The biological behaviour of iris cells in vitro was not yet completely investigated.
For a more detailed study of the scope of cultivation of iris cells in vitro we
isolated human iris pigment epithelium (IPE) cells and iris fibroblasts.
Materials and Methods For the purpose of this study iris cells were isolated from 19 donor eyes. A
method was established for isolation and cultivation of IPE cells by means of
fibronectin coating and the use of a special cell culture medium. Additionally,
a method was developed for the selection of fibroblasts from iris stroma (IS)
in vitro by means of fibronectin coating, passaging and proliferation in cell
culture medium.
Results The IPE and IS cells could be cultivated successfully. The IPE cells started
to divide after a mean interval of 5.4 ± 0.7 days in culture. The mitosis of IS
cells was observed after 3.3 ± 0.87 days in culture. Confluency of IPE cells
was reached after 14.7 ± 4.92 days and by IS cells after 8.1 ± 1.45 days. Immunocytochemical
staining using two antibodies for cytoceratin and one for human fibroblast showed
that the IPE cell culture was pure and that the IS culture consisted of fibroblasts.
Furthermore, electron microscopy of IPE and IS cultures confirmed the results
of the immunocytochemical staining.
Conclusions The use of human IS and IPE cells in vitro has established a novel model for
the research on iris cells. The model might possibly be applied in the research
of metabolic structures and diseases of the iris.
Schlüsselwörter
Iriszellen - Kultivierung
Key words
iris cells - cell culture
Literatur 1 Manuskript erstmalig eingereicht am 18. 3. 00 und in der vorliegenden Form angenommen
am 2. 4. 00.
2 Herrn Prof. Dr. G. O. H. Naumann gewidmet.
Human cell culture protocols. Totowa: Human Press; 1996: p.517-524. Histology of the human eye. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1971: p. 202-255.
