Z Gastroenterol 2007; 45 - A3_11
DOI: 10.1055/s-2007-967847

Periportale Luciferaseexpression unter Kontrolle des Promotors der Phosphoenolpyruvat-Carboxykinase in transgenen transplantierten Rattenhepatozyten

R Haftendorn 1, D Jäger 1, M Hempel 1, S Ebensing 1, B Christ 1
  • 1Universitätsklinik und Poliklinik für Innere Medizin I, Universität Halle-Wittenberg, Halle (Saale)

Ausgangssituation: Bei der Therapie von Stoffwechseldefekten der Leber stellt die Hepatozytentransplantation eine Alternative zur Lebertransplantation dar. Entscheidend für eine erfolgreiche Therapie ist die Integration und Funktionalität der transplantierten Hepatozyten im Empfängerorgan. Die Repopularsierung einer Empfängerleber durch primäre kultivierte Rattenhepatozyten wurde im Tiermodell gezeigt. Unbeantwortet ist jedoch die Frage, ob in den transplantierten Hepatozyten nach Integration in der Empfängerleber leberspezifische Gene physiologisch reguliert werden. Ziel: In adenoviral transduzierten primären Rattenhepatozyten wurde der leberspezifische Promotor der cytosolischen Phosphoenolpyruvat-Carboxykinase (PCK1) in Kultur physiologisch durch Glucagon (cAMP) und Insulin reguliert. Es sollte untersucht werden, ob der Promotor der PCK1 in transplantierten primären Hepatozyten auch in vivo nach der Integration der Zellen ins Empfängergewebe aktiviert würde. Methoden: Zum effizienten Gentransfer wurde ein adenoviraler Vektor konstruiert, der die Luciferase als Reportergen unter der Kontrolle des leberspezifischen Promotors der PCK1 exprimiert. Primäre kultivierte Rattenhepatozyten (DPPIV-Wildtyp) wurden für 6h transduziert und für weitere 48h kultiviert. Dann wurden die Zellen abgelöst und in mit dem Alkaloid Retrorsin behandelte DPPIV-/- -negative Empfängerratten nach Teilhepatektomie transplantiert. 7 Wochen nach Transplantation wurden die Lebern entnommen und die Expression des Luciferasetransgens bestimmt. Ergebnisse: 7 Wochen nach Transplantation wurden DPPIV-Wildtyp Zellen immunhistochemisch in Clustern im ansonsten DPPIV-negativen Wirtsleberparenchym nachgewiesen. Diese Cluster waren ausschließlich in periportalen Feldern zu finden und machten etwa 5% der gesamten Leberzellmasse aus. Sie enthielten adenovirale DNA, die mittels PCR nachgewiesen wurde. Durch RT-PCR wurde die Expression der Luciferase ausgehend vom PCK1-Promotor in den transplantierten Zellen detektiert. Schlussfolgerung: Nach ihrer periportalen Integration werden in transplantierten Hepatozyten transgene Promotoren aktiviert, die in genuinen Hepatozyten die Expression periportal lokalisierter Gene regulieren. Daher kann man vermuten, dass die Transgenexpression in transplantierten Hepatozyten zur Korrektur eines genetischen Defektes in topologisch korrekter Weise erfolgt.