Inhibition des Tumorwachstums von etablierten HCC-Tumoren und Rezidivprophylaxe durch intratumorale Behandlung mit CD40L-exprimierenden dendritischen Zellen in vivo

Einleitung: Dendritische Zellen (DC) können spezifische T-Zellen gegen Tumorantigene stark stimulieren. Ihr Einsatz gegen das HCC hat allerdings bisher nur begrenzten Erfolg gezeigt. Die Verwendung von Immunmodulatoren wie CD40L könnte die Wirkung von DC gegen das HCC steigern. In dieser Arbeit wurden Tumorlysat beladene DC mit einem CD40L-exprimierenden Adenovirus (Ad) zur Behandlung von etablierten HCC-Tumoren in vivo transduziert. Methodik: Es wurden zwei Ad verwendet: Ad-CD40L (mit CD40L) und Ad-LacZ (mit LacZ). DC wurden aus dem Knochenmark und Lymphozyten aus der Milz von C3H-Mäusen gewonnen. Am Tag 5 wurden die DC mit HCC-Tumorlysat beladen und am Tag 6 transduziert. Die Expression vom DC-typischen Oberflächenmarkern und von CD40L wurde mittels Durchflusszytometrie bestimmt. Durch ELISA wurde die IL–12-Expression im Zellüberstand gemessen. 10⁶ HCC-Zellen (Hepa129) wurden s.c. in C3H-Mäuse zur Tumorinduktion injiziert. Als die Tumoren eine Größe von >100mm³ erreicht hatten, wurden die Mäuse zweimal mit 1×10⁶ CD40L- oder LacZ-exprimierenden DC mittels intratumoraler Injektion behandelt. Ergebnisse: 48h nach der Transduktion von DC mit Ad-CD40L (MOI 250) exprimierten >40% Zellen CD40L und sie wiesen eine signifikant stärkere Expression von CD80 und CD86 als die Kontrolle auf. CD40L-DC zeigten eine starke Expression von IL–12 von >100ng/ml, die bereits bei MOI 100 nachzuweisen war. Das Tumorvolumen bei Mäusen, welchen mit Ad-CD40L-transduzierten DC behandelt wurden, war signifikant kleiner als das Tumorvolumen von mit Ad-LacZ-DCs behandelten Mäusen (562,6±149mm³ vs. 1363,8±127mm³; p<0,002). Die intratumorale Gabe von Ad-CD40L-DC induzierte eine komplette Tumorelimination in 66% der Mäuse. In der Kontroll-Gruppe wuchsen alle Tumoren weiter. Darüber hinaus konnte die durchschnittliche Überlebenszeit nach Tumorinduktion der CD40L-DC-immunisierten Mäuse signifikant verlängert werden (>90 Tage vs. 20.8±3.1 Tage in der Kontrollgruppe, p<0,05). Drei Monate nach tumorfreiem Überleben entstand nach erneuter Applikation von Tumorzellen s.c. oder intrahepatisch kein Tumor mehr. Diskussion: Unsere Daten zeigen, dass die intratumorale Behandlung mit Ad-CD40L-transduzierten DC, welche vorher mit Tumorlysat pulsiert wurden, eine komplette Tumorregression von s.c. HCC-Tumoren induzieren kann. Darüber hinaus zeigte sich eine verbleibende antitumorale Immunität, welche eine effektive Tumorrezidivprophylaxe sowohl subkutan als auch intrahepatisch bewirken konnte.