Die intronische p53-Bindungsstelle ist essentiell für die Transaktivierung des CD95 Gens durch die p53 Familie

E. Schulze Schleithoff; A. Kairat; A. Koch; K. Lorenz; P. H. Krammer; W. Stremmel; M. Müller

doi:10.1055/s-2007-988173

Zeitschrift für Gastroenterologie, Inhaltsverzeichnis

Die intronische p53-Bindungsstelle ist essentiell für die Transaktivierung des CD95 Gens durch die p53 Familie

E Schulze Schleithoff ¹, A Kairat ¹, A Koch ¹, K Lorenz ¹, PH Krammer ², W Stremmel ¹, M Müller ¹

¹Universität Heidelberg, Innere Medizin IV, Heidelberg, Germany
²Deutsches Krebsforschungszentrum, Heidelberg, Germany

Abstract

Einleitung: Die TA Isoformen von p63 (TAp63) und p73 (TAp73) können p53-Zielgene transaktivieren und so Apoptose induzieren, während von den dominant negativen (DeltaN) Isoformen (DeltaNp63 und DeltaNp73) angenommen wird, dass sie die p53-, TAp63- und TAp73- vermittelte Apoptose verhindern und so onkogen wirken können

Ziele: Untersuchung der transkriptionellen Aktivierung des CD95 Gens durch p53, TAp63, TAp73 und ihrer dominant negativen Isoformen.

Methodik:

1. Identifikation einer intronischen p53-Bindungsstelle im Intron 1 sowie dreier weiterer p53-Bindungsstellen im Promotor des CD95 Gens durch Immunoselektions-Assays.

2. Mutationen und Deletionen der p53-Bindungsstellen des CD95 Gens.

3. Luciferase-Reporter-Assays mit verschiedenen Reporter-Plasmiden des CD95 Gens.

4. Bindungsstudien: EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay).

Ergebnis: TAp63 und TAp73 transaktivieren das CD95 Gen über die p53-Bindungsstellen im Promotor und Intron 1. Durch Deletionen und Mutationen der p53-Bindungsstellen des CD95 Promotors konnten wir zeigen, dass eine Kooperativität zwischen den Promotorbindungsstellen und der intronischen p53-Bindungsstelle besteht. Durch Mutationen und Bindungsanalysen erwies sich die intronische Bindungsstelle als wichtigster enhancer für die Transaktivierung des CD95 Gens durch p53, p63 und p73. Die dominant negativen Isoformen von p63 und p73 können die Transaktivierung durch die jeweiligen TA-Isoformen inhibieren.

Schlussfolgerung: Das CD95 Gen, als ein zentrales Gen des extrinsischen Apoptose-Signalweges, wird durch alle TA-Isoformen der p53 Familie über Bindung an die p53-Bindungsstellen im Promotor und Intron 1 transaktiviert. Diese Transaktivierung wird durch die dominant negativen Isoformen von p63 und p73 verhindert, und so CD95- vermittelte Apoptose inhibiert. Direkte Inhibition von Apoptose-Zielgenen, wie von uns am Beispiel des CD95 Gens gezeigt, ist ein Mechanismus der onkogenen Wirkung der dominant negativen Isoformen der p53 Familie.