Mikroinjektion von Spermatozoen in die Eizelle

Zusammenfassung

In dieser Arbeit wird nach Möglichkeiten gesucht, durch assistierte Konjugation die häufig zu beobachtende Sterilität in Fällen von Oligo-Asthenozoospermie zu beheben. Es werden lebhaft bewegliche Spermatozoen nach vollendeter Akrosomreaktion in die Eizelle der Maus injiziert. Nach 2 Stunden Inkubationszeit im Medium mit Kalziumlaktat und Albumin, werden die Spermatozoen mit Dibutyryl 3′, 5′-Guanosin-Monophosphat (dbcGMP) und Imidazol, um die Akrosomreaktion hervorzurufen, behandelt. Die Überlebensrate der Oozyten nach Injektion war durchschnittlich 85%. Oozyten mit 2 Pronuklei und einem zweiten Polkörperchen werden als fertilisiert angesehen. Bei 21,5% aller injizierten Eizellen erzielten wir im Vergleich zu nur 5% bei Mikroinjektion mit Spermien ohne dbcGMP-Behandlung eine Fertilisierung. Motile und akrosomreagierte Spermatozoen fertilisieren somit bei der Mikroinjektion Oozyten wesentlich besser als nichtakrosomreagierte Spermatozoen. Diese Technik könnte für das Erreichen einer Gravidität bei menschlicher Oligo-Asthenozoospermie in einem IVF-ET-Programm angewandt werden.

Abstract

This study investigates the possibilities to treat oligo-asthenozoospermia, a cause of sterility, by assisted conjugation. After completing acrosome reaction, normal motile spermatozoa are microinjected into mouse ooeytes. After 2 hours of incubation time in medium with lactate and albumins, spermatozoa are put into dibutyryl 3′, 5′-guanosine monophosphate (dbcGMP) and imidazole for the completion of an acrosome reaction. One motile Spermatozoon each was injected microsurgically into the perivitelline space of an oocyte. The survival rate of the ooeytes after injection was around 85%. The oocytes with two pronuclei and a second polar body were considered as fertilized. Of those injected oocytes 21,5% were fertilized with acrosome reacted spermatozoa, whereas only 5,6% were fertilized with spermatozoa without dbcGMP treatment. Thus, motile and acrosome reacted spermatozoa essentially fertilize oocytes at microinjection into the perivitelline space very well. This technique may become a hopeful procedure to treat human oligo-asthenozoospermia in an IVF/ET-programme.