CD44v6-basierte CAR T-Zell Therapie für Kopf-Hals-Plattenepithelkarzinome

Einleitung Immuntherapie mit chimären Antigen-Rezeptoren (CARs) stellt eine zukünftige Therapieoption für Kopf-Hals-Plattenepithelkarzinome (KHP) dar. Ein artifizielles CAR-Konstrukt aus Einzelketten-Fragment (scFv), Linker sowie Transmembran- und zytoplasmatischer Domäne kombiniert hierbei Tumor-assoziierte Antigen (Ag)-Erkennung mit T-Zell-Aktivierung. CD44v6, eine Spliceform von CD44, ist als KHP-assoziiertes Antigen zielgeeignet. Deshalb entwickelten wir eine CD44v6-spezifische CAR T-Zell Therapie gegen CD44v6⁺ KHP-Zellen in vitro.

Methode 33 primäre KHP-Zelllinien (ZL) wurden hinsichtlich ihrer CD44v6 und CD44 Expression via Durchflusszytometrie gemessen. Als Positivkontrolle wurde CD44v6 cDNA lentiviral in die ZL UT24A eingebracht. Der klonierte CD44v6 CAR wurde lentiviral in primären humanen T-Zellen exprimiert. Es erfolgte eine Ko-Kultur von CD44v6 CAR⁺ T-Zellen und KHP-ZL für 16h zur Ermittlung des zytotoxischen Potenzials und anschließend eine Messung der KHP-Lyserate mit einem CellTiter Proliferationsassay (Promega). Ergebnisse: In den KHP-ZL variieren die Expressionen von CD44v6 und CD44. Die Kokultivierung der KHP-Zellen und CAR⁺ T-Zellen zeigt eine Abhängigkeit der Lyseeffizienz der CAR T-Zellen von der Ag-Dichte auf den KHP-ZL: ZL mit höherer CD44v6 Expression (UM14C, UM11B, UM10BPT) werden bereits in niedriger Ziel-Effektor-Konzentration lysiert, während ZL UT24A mit niedriger Expression weniger effizient eradiziert wird. Lentivirale Überexression von CD44v6 steigert die Lyse der ZL UT24A durch CD44v6 CAR⁺ T-Zellen, was eine Spezifität des CD44v6 CARs beweist.

Schlussfolgerung In dieser Proof-of-Concept-Studie etablierten wir eine spezifische, auf CD44v6-gerichtete CAR T-Zell Therapie für KHP.

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Article published online:
10 June 2020