Automatisierte Bestimmung des synovialen Zellgehalts beim Rind mittels ADVIA 2120i

Ziel der Studie Die automatisierte Bestimmung von Zellzahl (ZZ) und Zelldifferenzierung (ZD) ist in Synovia aufgrund der Viskosität herausfordernd. Daher ist das Ziel des Projektes 1. die Validierung der automatisierten Bestimmung von bovinen Gelenkpunktaten mittels ADVIA 2120i (Siemens Healthcare GmbH, Erlangen) und 2. die Überarbeitung des Referenzbereichs für ZZ und ZD in physiologischer Synovia beim Rind.

Material und Methoden Insgesamt wurde die durch Arthrozentese gewonnene Synovia von 100 Gelenken (davon 38 gelenksgesund nach makroskopischer Beurteilung) untersucht. Zur Viskositätsminderung wurden 5 µl gelöste Hyaluronidase (H) aus Schaftestes (1000 U/ml) auf 100 µl Synovia gegeben und mindestens 5 min inkubiert. Manuell wurde die Zellzählung in der Zählkammer nach Neubauer und eine Pappenheimfärbung der Synoviaausstriche zur lichtmikroskopischen ZD durchgeführt. Die ZZ-Bestimmung und ZD wurden zudem automatisiert ohne (nativ) und mit H-Zusatz durchgeführt: Bestimmung von Zellkernvolumen und Chromatindichte (Baso-Kanal), Beurteilung von Zellgröße und endogener Peroxidaseaktivität (Perox-Kanal).

Ergebnisse Manuell wurden in den Proben gesunder Gelenke (n = 38) im Mittel 83 ± 84 Zellen/µl gezählt. Die ZD ergab folgende Zelltypen: Lymphozyten, neutrophile Granulozyten (Neut) und Makrophagen. Die mittlere ZZ in Synoviaproben gesunder Gelenke betrug im Peroxkanal 107 ± 92 Zellen/µl und die ZD zeigte Neut, Lymphozyten, Monozyten, eosinophile und basophile Granulozyten sowie eine noch zu bestimmende Zellpopulation mit großem Zellvolumen. Beide ZZ-Messmethoden korrelierten (r = 0,986, n = 100). Bei Proben mit niedrigen ZZ (< 1000 Zellen/µl) lag der Variationskoeffizient (VK) im Intra-Assay nativ bei 5,22 % (Perox-Kanal) und 34,40 % (Baso-Kanal). Mit H lag der VK im gleichen ZZ-Bereich bei 13,81 % im Perox- und 9,14 % im Baso-Kanal. Die Zugabe von H senkte den VK im Baso-Kanal deutlich (VK < 15%).

Schlussfolgerung Der ADVIA 2120i ist zur automatisierten synovialen ZZ-Bestimmung beim Rind geeignet und der H-Zusatz im Baso-Kanal senkt die Variation der Methode, die durch die Viskosität der Synovia bedingt ist. Die automatisierte ZD muss noch weiter angepasst und mit der manuellen Methode abgeglichen werden.

Publication History

Article published online:
07 March 2024