Abbau des Na+-Taurocholate Cotransporting Polypeptide (Ntcp) durch das Ubiquitin-Proteasomen-System

Das Na⁺-Taurocholate Cotransporting Polypeptide (Ntcp, Slc10a1) ist der wichtigste Aufnahmetransporter für Gallensalze in Leberzellen. In dieser Studie wurde die Degradation des Ntcp der Ratte und des humanen NTCP durch das Ubiquitin-Proteasomen-System (UPS) untersucht. Das Wildtyp-Ratten-Ntcp wurde mit dem grün fluoreszierenden Protein (GFP) und 6-Histidinen fusioniert und in HepG2-Zellen stabil transfiziert (Ntcp-GFP-His). Unter Kontrollbedingungen war Ntcp-GFP-His komplex-glykosyliert und befand sich in der basolateralen Membran. Hemmung der Proteasomen durch MG–132 oder Lactacystin führte zu einer starken Anreicherung des Ntcp in intrazellulären Aggregaten. Ntcp aus diesen Aggregaten zeigte Aggresomen-typische Charakteristika: (1) aggregiertes Ntcp war Detergenzien- resistent, (2) es war core-glycosyliert (als Hinweis für den Ursprung aus dem ER), (3) es zeigte nach Aufreinigung über den His-Tag eine Polyubiquitinierung und (4) es co-lokalisierte mit γ-Tubulin und Ubiquitin. Transiente Transfektion des Ratten- Ntcp oder des humanen NTCP führte bereits in Abwesenheit von Proteasomen-Hemmstoffen zur Aggresomen-Bildung. In Lebern von Patienten mit progressiver familiärer intrahepatischen Cholestase Typ 2 oder 3 (PFIC–2/3: Defekte der Gallensalzexportpumpe BSEP oder des P-Glycoproteins MDR3) konnte ebenfalls NTCP in Co- Lokalisation mit Ubiquitin gefunden werden. Die Befunde sprechen dafür, dass Ntcp/NTCP zu einem erheblichen Anteil über das UPS im Rahmen der ER-assoziierten Degradation (ERAD) abgebaut wird. Ein Ungleichgewicht zwischen Synthese und Abbau des Ntcp/NTCP durch ERAD oder eine gestörte ER- assoziierte Degradation sind mögliche Ursachen der intrazellulären Ablagerung des NTCP bei Überexpression oder im Rahmen cholestatischer Lebererkrankungen.

Key words

Aggresomen - ER-assoziierte Degradation - PFIC