Einfluss von NO auf die Angiotensin II Rezeptortyp 1 (AT1)-Expression der Leber

Einleitung: Das Renin-Angiotensin-System (RAS) spielt eine entscheidende Rolle bei der Fibrogenese der Leber und ist ein Target zur medikamentösen Therapie. Wie jedoch in vorangegangenen Untersuchungen gezeigt werden konnte, kommt es im Rahmen der Fibrose-Progression zur Abnahme der AT1-Expression in der Leber mit Verschiebung des AT1-Expression-Verteilungsmusters. Während in den niedrigen Fibrosestadien immunhistochemisch vor allem Hepatozyten stark positiv für den AT1-Rezeptor sind, erscheinen in den höheren Fibrosestadien hauptsächlich Myofibroblasten der Septen, Endothelien und Gallengänge stark positiv. Ein möglicher Modulator der AT1-Expression könnte neben der Fibrose auslösenden Noxe auch eine veränderte Stickstoffmonoxid (NO) Synthese in der Leber sein.

Ziel dieser Untersuchung ist es, in vitro den Einfluss von NO auf die AT1-Expression in der Leber zu untersuchen.

Methoden: Immunhistochemische Untersuchungen zur iNOS Expression wurden in humanen Leberbiopsien mit Fibrose Stadium 1 und 4 (Einteilung nach Desmet) bei chronischer HCV Infektion durchgeführt. Der Einfluss von NO (mittels SNAP oder Stimulation der iNOS) auf die AT1-Expression wurde in unterschiedlichen Zelllinien (hepatische Sternzelllinie: HSCT6; Hepatoma-Zelllinien: H4-II-E-C3, HepG2) und an primär isolierten HSC mit Hilfe von Western Blot und realtime PCR quantitativ untersucht. Die NO-Spiegel in den Überständen der Zellkultur wurden colorimetrisch bestimmt.

Ergebnisse: Histologisch zeigte sich eine Zunahme der iNOS Expression im Rahmen der Fibrose-Progression auf Hepatozyten. In den Septen und Portalfeldern konnte keine iNOS-Expression nachgewiesen werden. Die AT1-Expression in HSCT6/HSC wurde auf mRNA- und Protein- Ebene unter dem Einfluss von NO herunterreguliert. Dies konnte sowohl mittels Zugabe von SNAP, einem NO Donor, als auch durch die iNOS Stimulation mit LPS und Interferon g nachgewiesen werden. Der Effekt der iNOS Stimulation konnte durch den spezifischen Inhibitor L-NIL wieder aufgehoben werden. Die Hepatoma-Zelllinien zeigten ebenfalls eine verminderte Expression unter dem Einfluss des NO Donors SNAP.

Zusammenfassung: NO hemmt die AT1-Expression in Hepatozyten und HSC in vitro. Wie histologisch gezeigt, kommt es unter Fibrose Progression zur verstärkten iNOS Expression in den Hepatozyten, nicht jedoch in den Septen. Unsere Daten unterstreichen daher die Hypothese einer negativen Korrelation zwischen AT1- und iNOS- Expression in vivo.

AT1 - Fibrogenese - NO - iNOS