Ki-ras-Mutation als molekularer Tumormarker für Pankreaskarzinome

Zusammenfassung

Mehr als 90 % der Pankreaskarzinome tragen Mutationen am Codon 12 des Ki-ras-Onkogens. Zum Nachweis dieses charakteristischen molekularen Markers wurde bei 69 Patienten (41 Männer, 28 Frauen), bei denen unter dem Verdacht auf eine Pankreatitis oder ein Pankreaskarzinom eine endoskopische retrograde Pankreatographie erfolgte, zelluläre DNA aus Pankreassekreten und Punktionzytologien durch Polymerase-Kettenreaktion (PCR) amplifiziert. Zwei verschiedene Verfahren wurden zur Darstellung von Mutationen am Codon 12 des Ki-ras-Gens entwickelt. Mit Hilfe des einen Verfahrens, einer »enrichment-PCR« mit Analyse der Restriktionsfragmentlängen (RFLP) konnten bei 29 von 33 Patienten mit Pankreaskarzinom im unstimulierten Pankreassekret Mutationen am Codon 12 des Ki-ras-Gens nachgewiesen werden. In allen elf untersuchten Punktionszytologien zeigten sich tumorspezifische Mutationen. Nach Direktsequenzierung von »enrichment«-PCR-Produkten gelang der Nachweis einer Codon-12-Mutation im Pankreassekret bei 21 von 24 Patienten und mit der »single strand conformation polymorphism«-Analyse bei 17 von 33 Patienten. Bei zwei der 33 Pankreaskarzinome wurden zwei verschiedene Ki-ras-Mutationen entdeckt. Bei akuten Entzündungen und Steinleiden fanden sich keine Mutationen, während bei den Patienten mit chronischer Pankreatitis (n = 5) nur diejenigen Mutationen aufwiesen, bei denen histologisch die Diagnose einer präkanzerösen muzinösen Hyperplasie (n = 2) gestellt wurde. Diesen Untersuchungen zufolge sind Codon-12-Mutationen des Ki-ras-Gens, nach PCR in Pankreassekreten und Biopsaten nachgewiesen, ein sensitiver und spezifischer Tumormarker, dessen klinischer Wert derzeit überprüft wird.

Abstract

More than 90 % of tumours of the pancreas have mutations on codon 12 of the Ki-ras oncogene. Cellular DNA from pancreatic secretions and fine-needle biopsies, obtained from 69 patients (41 men, 28 women), were amplified by the polymerase chain reaction (PCR) to demonstrate this characteristic marker. All these patients had undergone endoscopic retrograde pancreatography for suspected pancreatitis or carcinoma of the pancreas. Two different methods were developed to demonstrate the mutations. With the aid of one of these methods, enrichment PCR with analysis of the restriction fragment length (FL), mutations on codon 12 of the Ki-ras gene were demonstrated in unstimulated pancreatic secretions of 29 of 33 patients with pancreatic carcinoma. All eleven fine-needle biopsies that had been cytologically examined showed the tumour-specific mutation. After direct sequencing of enrichment PCR a codon 12 mutation was demonstrated in pancreatic secretion from 21 of 24 patients and with the single strand conformation polymorphism analysis in 17 of 33 patients. In two of these 33 patients two different Ki-ras mutations were discovered. No mutations were found in acute inflammations or stone disease, while in five patients with chronic pancreatitis mutations were demonstrated only in those two patients in whom histological examination had revealed precancerous mucinous hyperplasia. - This investigation indicates that codon 12 mutations of the Ki-ras gene, found after PCR in pancreatic secretion and biopsies, constitute a sensitive and specific tumour marker whose clinical value is being assessed.