Restriktionsenzym-Mismatch-Polymerase-Kettenreaktion zum Nachweis von Ki-ras-Onkogen-Mutationen beim Pankreaskarzinom

Zusammenfassung

In einer Pilostudie sollte geprüft werden, ob sich die Restriktionsenzym-Mismatch-Polymerase-Kettenreaktion (Kombination von Polymerase-Kettenreaktion und Prinzipien des Restriktionsfragmentlängenpolymorphismus) für die Routinediagnostik beim Pankreaskarzinom eignet. Mit der Methode werden Punktmutationen im Codon 12 des Ki-ras-Onkogens erkannt. Untersucht wurden 60 zytologische Proben aus dem pankreatobiliären Trakt, dem bronchopulmonalen System (bronchoalveoläre Lavage oder Pleuraerguß) und aus Aszites. Als Kontrollen dienten neun Pankreaskarzinomzellinien. Ein PCR-Produkt wurde erfolgreich bei allen Zellinien und bei 47 der 60 klinischen Proben amplifiziert. Bei allen acht Proben, die ein mutiertes Ki-ras-Onkogen aufwiesen, war zytologisch wenigstens der Verdacht auf Malignität geäußert worden. Vier von fünf Pankreaskarzinomen wiesen eine Mutation im Codon 12 des Ki-ras-Gens auf. Bei einem klinisch sicher diagnostizierten Pankreaskarzinom konnte mit der verwendeten Methode keine Mutation nachgewiesen werden. - Die untersuchte Methode ist eine elegante und vor allem schnelle Methode, um die zytologische Diagnostik mittels molekularbiologischen Methoden zu unterstützen und zu optimieren.

Abstract

A pilot study was undertaken to test whether combining the polymerase chain reaction with restriction fragment length polymorphism is suitable for the routine diagnosis of carcinoma of the pancreas. The method makes it possible to recognize point mutations in codon 12 of the Ki-ras oncogene. 60 cytological specimens from the pancreatobiliary tract, the bronchopulmonary system (by bronchoalveolar lavage or from pleural effusion) and ascites were tested. Results from nine pancreas carcinoma cell lines served as control. A PCR product was successfully amplified in all cell lines and 47 of the clinical specimens. In all eight samples in which a mutated Ki-ras oncogene was demonstrated, there was at least a suspicion of malignancy by cytological examination. A mutation was also found in four of five pancreas carcinomas. But no mutation was found in one, clinically certain, case of pancreas carcinoma. - The described method is an elegant and, most of all, rapid means to complement and optimize any cytological diagnosis.