Familiärer Brustkrebs: 2-Stufen-Gendiagnostik zum Nachweis von BRCA1- und BRCA2-Mutationen in Risikofamilien

Zusammenfassung

Fragestellung und Methodik

Fragestellung und Methodik: Es wurde ein 2-stufiges Verfahren zum Screening von BRCA1- und BRCA2-Sequenzvarianten in Risikofamilien entwickelt und in einem Kollektiv von 120 Frauen eingesetzt. Der Stufe 1-Test weist die 18 häufigsten krankheitsassoziierten BRCA1- und 9 BRCA2-Mutationen nach. Darin enthalten sind 6 der 7 bisher bekannten häufiger vorkommenden deutschen Mutationen. Bei negativem Stufe 1-Testausgang ist im Rahmen eines Stufe 2-Tests ein vollständiges Mutationsscreening mittels Fluoreszenz-CSGE und Fragmentsequenzierung erforderlich.

Ergebnisse

Ergebnisse: 45 der 120 Patientinnen wurden im Stufe 1-Test untersucht, wobei in 6 Fällen (13 %) krankheitsassoziierte Mutationen nachgewiesen wurden. Vergleichsweise detektierte der nachfolgende Stufe 2-Test in 3 von 114 Patientinnen, einschließlich der 39 Patientinnen mit negativem Stufe 1-Testausgang, eine krankheitsassoziierte Mutation (1,7 %). Daraus folgt, dass die Mehrzahl der Anlageträgerinnen bereits im Stufe 1-Testverfahren erfasst werden konnte. Hinsichtlich der Indikationsstellung für einen Stufe 2-Test ist es erwähnenswert, dass 2 Patientinnen ohne klare Familienanamnese positiv getestet wurden. In einem Fall (Patientin 2535) war nur eine Angehörige an einem bilateralen multifokalen Mammakarzinom erkrankt. Im zweiten Fall (Patientin 2533) handelte es sich um eine Patientin ohne Familienbelastung, die an einem medullären Mammakarzinom erkrankt war.

Schlussfolgerung

Schlussfolgerung: Insgesamt stützen die Ergebnisse die Annahme, dass ein Vorscreening auf der Grundlage der häufigsten bekannten Mutationen bereits heute sinnvoll und effektiv ist. Dadurch kann der Aufwand für ein umfassendes Mutationsscreening beider Gene im nachgeschalteten Stufe 2-Test reduziert werden.

Abstract

Objective

Objective: We used a two-stage screening procedure for sequence variations in the BRCA-1 and BRCA-2 genes in high-risk families. The initial test identifies the 18 most common disease-associated mutations, including six of the seven more common mutations in Germany. Patients with negative first-stage results undergo complete mutation screening with fluorescence CSGE and fragment sequencing.

Methods

Methods: 120 women were studied.

Results

Results: 45 women underwent the first-stage test, six of whom (13%) showed disease-associated mutations. The second-stage test yielded three disease-associated mutations (1.7%) in 114 women, including the 39 with a negative first-stage test. Two of these three patients (one with a relative with a bilateral multifocal breast cancer, the other with a medullary carcinoma and a negative family history) did not have a clearly positive family history.

Conclusion

Conclusion: Most carriers of BRCA mutations can be identified with a one-step test for the most common mutations, reducing the need for comprehensive screening.

Literatur

• 1 Abbaszadegan M R, Streuwing J, Srown K M, Snider J, Gore-Langton R, Hughes M R. Automated detection of highly prevalent mutations in BRCA1 and BRCA2 genes using a fluorogenic PCR.  Genet Test. 1998;  1 171-180
• 2 Brody L C, Biesecker D B. Breast cancer susceptibility genes.  Medicine. 1998;  77 208-226
• 3 Couch F J, Weber B L. Breast cancer information core: Mutations and polymorphisms in the familial early-onset breast cancer BRCA1 gene.  Hum Mutat. 1996;  8 8-18
• 4 Eisinger F, Jacquemier J, Charpin C, Stoppa-Lyonnet D, Bressac-Depaillerets B, Peyrat J P, Longy M, Guinebretiere J -M. . Mutations at BRCA1: The medullary breast carcinoma revisited.  Cancer Res. 1998;  58 1588-1592
• 5 Ellisen L W, Haber D A. Hereditary breast cancer.  Ann Rev Med. 1998;  49 425-436
• 6 Ganguly A, Rock M J, Prockop D J. Conformation-sensitive gel electrophoresis for rapid detection of single-base differences in double-stranded PCR products and DNA fragments: Evidence for solvent-induced bends in DNA heteroduplexes.  Proc Natl Acad Sci USA. 1993;  90 10 325-10 329
• 7 Ganguly A, Lealiy K, Marshall A, Dhulipala R, Godmilow L, Ganguly T. Genetic testing for breast cancer susceptibility: Frequency of BRCA1 and BRCA2 mutations.  Genet Test. 1997;  1 85-90
• 8 Ganguly T, Dhulipala R, Godmilow L, Ganguly A. High throughput fluorescence-based conformation sensitive gel electrophoresis (F-CSGE) identifies six unique BRCA2 mutations and an overall low incidence of BRCA2 mutations in high-risk BRCA1-negative breast cancer families.  Hum Genet. 1998;  102 549-556
• 9 Johannesdottir G, Gudmundsson J, Bergthorsson J T, Arason A, Bjarn A. High prevalence of the 999 del5 mutation in icelandic breast and ovarian cancer patients.  Cancer Res. 1996;  56 3663-3665
• 10 Körkkö J, Pihlajamaa T, Prockop D J, Ala-Kokko L. Conformation sensitive gel electrophoresis for simple and accurate detection of mutations: Comparison with denaturating gel electrophoresis and nucleotide sequencing.  Proc Natl Acad Sci USA. 1998;  95 1681-1685
• 11 Livak K J, Marmaro J, Todd J A. Towards fully automated genome-wide polymorphism screening.  Nat Genet. 1995;  9 341-342
• 12 Livak K J, Marmaro J, Flood S. Guidelines for designing TaqMan fluorogenic probes for 5′nuclease. ABI PRISM sequence detection systems. Research News. The Perkin-Elmer Corporation 1995 a
• 13 Markoff A, Sormbroen H, Bogdanova N, Preisler-Adams S, Gauen V, Dwornizak B, Horst J. Comparison of conformation sensitive gel electrophoresis and single-strand conformation polymorphism analysis for detection of mutations in the BRCA1 gene using optimized conformation analysis protocols.  Eur J Hum Genet. 1998;  6 145-150
• 14 Meindl A. A BRCA1 and BRCA2 mutation profile for german breast and ovarian cancer families. The german consortium for hereditary breast and ovarian cancer.  Med Gen. 1999;  11
• 15 Miki Y, Swensen J, Shattuck-Eidens D, Futreal P A, Harshman K, Tavtigian S, Liu Q, Cochran C, Bennet L M, Ding W, Bell R, Rosenthal J, Hussey C, Tran T, Mcclure M, Frye C, Hattier T, Phelps R, Haugen-Strabo A, Katcher A, Yakumo K, Gholami Z, Shaffer D, Stone S, Bayer S, Wray C, Bogden R, Dayanant H P, Ward J, Tonin P, Narod S, Bristow P K, Norris F H, Helvering L, Morrison P, Rosteck P, Lai M, Barrett J C, Lewis C, Neuhausen S, Cannon-Albright L, Goldgar D, Wiseman R, Kamb A, Skolnick M H. A strong candidate for the breast and ovarian cancer susceptibility gene BRCA1.  Science. 1994;  266 66-71
• 16 Olsen J H, Seersholm N, Boice J D, Krüger K, Fraumeni J F. Cancer risk in close relatives of women with early-onset breast cancer - a population-based incidence study.  Brit J Cancer. 1997;  79 673-679
• 17 Rahman N, Stratton M R. The genetics of breast cancer susceptibility.  Ann Rev Genet. 1998;  32 95-121
• 18 Roa B B, Boyd A A, Volcik K, Richards C S. Ashkenazi jewish population frequencies for common mutations in BRCA1 and BRCA2.  Nature Genet. 1996;  14 185-187
• 19 Spitzer E, Abbaszadegan M R, Schmidt F, Hauser A, Buwitt U, Lauter F -R, Pötschick K, Krocker J, Elling D, Grosse R. Detection of BRCA1 and BRCA2 mutations in breast cancer families by a comprehensive two-stage screening procedure.  Int J Cancer. 2000;  85 474-481
• 20 Szabo C I, King M -C. Population genetics of BRCA1 and BRCA2.  Am J Hum Genet. 1997;  60 1013-1020
• 21 Wooster R, Neuhausen S L, Mangion J, Quirk Y, Ford D, Collins N, Nguyen K, Seal S, Tran T, Averill D, Fields P, Marshall G, Narod S, Lenoir G M, Lynch H, Feunteun J, Devilee P, Cornelisse C J, Menko F H, Daly P A, Ormiston W, Mcmanus R, Pye C, Lewis C M, Cannon-Albright L A, Peto J, Ponder B AJ, Skolnick M H, Easton D F, Goldgar D E, Stratton M R. Localization of a breast cancer susceptibility gene, BRCA2, to chromosome 12 q12 - 13.  Science. 1994;  265 2088-2090