Zusammenfassung
Gegenstand und Ziel: Übergangszellkarzinome (ÜZCa) sind die häufigsten malignen Tumoren der harnableitenden
Wege beim Hund. In früheren Studien wurde mittels DNA-Sequenzierung in Urinproben,
Gefrier- und Paraffinmaterial von Harnblasenbioptaten die Mutation im BRAF-Gen V595E
bei bis zu 85 % der kaninen ÜZCa in den Tumorzellen identifiziert. Ziel der eigenen
Arbeit war, diese Methode für zytologische Ausstriche zu etablieren und die Prävalenz
dieser Mutation im eigenen Kollektiv zu untersuchen. Material und Methoden: Es wurden 43 formalinfixierte Bioptate, 48 Urinproben und/oder 31 zytologische Ausstriche
von 66 Hunden mit ÜZCa (n = 33), Harnblasenpolypen (n = 7), Zystitis (n = 23) oder
ohne Harnblasenerkrankung (n = 3) analysiert. Die DNA-Isolierung erfolgte mit kommerziell
erhältlichen Testkits. Das Exon 15 wurde mittels Sanger-Sequenzierung auf das Vorliegen
der BRAF-Mutation c.1784T>A untersucht. Ergebnisse: Aus 39/43 Paraffinproben, 38/48 Urinproben und 16/18 zellreichen Ausstrichen ließ
sich eine ausreichende Menge auswertbarer DNA isolieren. Bei 10/13 zellarmen Ausstrichen
reichte die DNA für eine aussagefähige PCR nicht aus. In allen Fällen, in denen verschiedene
Materialien vorlagen, stimmten die Ergebnisse der BRAF-Genanalyse in den Paraffin-,
Urin- und/oder Zytologieproben des jeweiligen Hundes überein, sofern sich DNA isolieren
ließ. Bei 22/31 Hunden (70,9 %) mit einem ÜZCa wurde die Mutation festgestellt, während
sie bei keinem Hund mit Zystitis, Polypen oder ohne Harnblasenveränderung gefunden
wurde. Schlussfolgerung und klinische Relevanz: Die Untersuchung auf Vorliegen einer BRAF-Variante stellt ein gutes neues Verfahren
dar, mit dem sich in Zweifelsfällen die Verdachtsdiagnose eines ÜZCa häufig absichern
lässt. Für die Methode eignen sich alle nichtinvasiv gewonnenen, zellreichen Materialien
wie Ausstriche von Urinsediment oder Ansaugbioptate sowie formalinfixierte Bioptate.
Aber nur der positive Befund ist beweisend. Hinsichtlich der prognostischen und therapeutischen
Relevanz sowie der Möglichkeiten einer Frühdiagnostik von ÜZCa mittels der BRAF-Mutationsanalyse
bedarf es weiterer Untersuchungen.
Summary
Objective: Transitional cell carcinoma (TCC) is the most common malignant tumour of the canine
urinary tract. Previously, the mutation of the BRAF gene V595E was identified in approximately
85 % of canine TCC cases by DNA sequencing of TCC tumour cells, both in frozen and
paraffin-embedded tissue sections, as well as in urine. The objective of this study
was to establish these methods in cytological smears and to investigate the prevalence
of BRAF mutation V595E in canine TCC in our cohort of patients. Material and methods: Biopsy samples (n = 43), urine (n = 48) and/or cytological smears (n = 31) from 66
dogs with TCC (n = 33), urinary bladder polyps (n = 7), cystitis (n = 23) or without
bladder diseases (n = 3), submitted for routine diagnostics, were selected. DNA isolation
from paraffin material, urine and cytological smears was performed using commercially
available kits. Exon 15 was examined for the presence of the BRAF mutation c.1784T>A
by Sanger sequencing. Results: In 39/43 paraffin-embedded biopsies and 38/48 urine samples, a sufficient amount
of good quality DNA was isolated. DNA isolation and sequencing were successful in
16/18 smears with a high cell count, but not in the 10/13 smears with low cellularity.
In all cases from which different sample materials were available, the results of
BRAF analysis were identical in paraffin-embedded tissue, cytological smears and/or
urine. In 22/31 dogs (70.9 %) with TCC, the presence of the BRAF mutation was confirmed,
whereas it could not be detected in animals without pathological findings or with
cystitis or with a polyp. Conclusion and clinical relevance: BRAF mutation analysis is a new and good method to be able to mostly confirm a diagnosis
of TCC in uncertain cases. Non-invasive diagnostic samples, including urine and urine
sediment containing sufficient numbers of relevant cells as well as cytology aspirates
and formalin-fixed biopsies can be used for analysis. However, it is important to
note that only a positive identification of the mutation is diagnostic. Further research
is necessary to investigate prognostic and therapeutic relevance of the variant and
how this genetic analysis can be used as an early detection method for TCC.
Schlüsselwörter
Übergangszellkarzinom - Hund - Mutation - Molekulargenetik - Gentest - Tumormarker
Keywords
Transitional cell carcinoma - dog - mutation - molecular genetics - genetic test -
tumour marker
