Summary
In order to study the clinical effects of the antioxidant α-tocopherol (tocofersolan,
CAS 30999-06-5) a simple, robust, sensitive and reliable high performance liquid chromatography
(HPLC) method using fluorescence detection for the daily measurement of α-tocopherol
concentration in plasma is described. Several methods of HPLC analysis using fluorescence
techniques are published, however, investigations of the stability of α-tocopherol
during sample preparation under different conditions are relevant in the routine measurements
and have to date not been reported.
Therefore a modified method, both sensitive and robust, qualified for the day-by-day
measurement of α-tocopherol in plasma was established and the stability of α-tocopherol
during sample preparation was analysed under different conditions. This method enables
the complete separation of α-tocopherol from other compounds within 14 min. In addition,
investigations on the stability of α-tocopherol during sample preparation showed the
necessity of rapid sample preparation without delay. Prepared samples can be stored
in liquid nitrogen for at least 56 days.
Zusammenfassung
Bestimmung von α-Tocopherol in Plasma mit Hilfe der Hochdruckflüssigkeits-Chromatographie
in Huoreszenzdetektion sowie seiner Stabilität unter verschiedenen Bedingungen
Es wird eine in der Durchführung einfache, zuverlässige und empfindliche Methode zur
Bestimmung von α-Tocopherol (Tocofersolan, CAS 30999-06-5) in Plasma mittels Hochdruckflüssigkeits
Chromatographie (HPLC) in Fluoreszenzdetektion beschrieben, mit deren Hilfe sich die
a-Tocopherol-Plasmakonzentration problemlos täglich bestimmen läßt. Die engmaschige
Konzentrationsbestimmung des Antioxidans α- Tocopherol ist zur Beurteilung des aktuellen Antioxidantienstatus und zur Untersuchung
klinischer Effekte nach Substitution bei postoperativen/posttraumatischen Patienten
sinnvoll. Verschiedene Methoden der α- Tocopherol-Bestimmung mittels HPLC in Huoreszenzdetektion wurden bislang beschrieben.
Untersuchungen zur Stabilität des Antioxidans während der Probenaufarbeitung fehlen,
sind jedoch für die klinische Anwendung relevant.
Daher wurde eine modifizierte Methode zur α-Tocopherol-Bestimmung im Plasma etabliert
und die Stabilität der venösen Proben während der unterschiedlichen Aufarbeitungsschritte
überprüft.
Die Methode ermöglicht bei kurzer Analysezeit (14 min) die vollständige Trennung des
α-Tocopherol-Peaks von anderen. Es zeigte sich, daß die Proben ohne Verzögerungen
aufgearbeitet werden sollten. Nach Probenaufarbeitung können diese für mindestens
56 Tage in flüssigem Stickstoff gelagert werden.
Key words CAS 30999-06-5 - Tocofersolan - α-Tocopherol, determination in plasma, stability -
Vitamin E
