Ein einfaches und spezifisches Verfahren zur Entfernung von Heparin aus Zitratplasma

Zusammenfassung

Heparin hat einen signifikanten Einfluß auf eine ganze Reihe von Laboruntersuchungen in der Hämostase. Häufig gelingt daher unter Heparintherapie nicht mehr der Nachweis von bestimmten Gerinnungsstörungen, deren Kenntnis jedoch für die weitere Therapie von Bedeutung wäre. Durch Einsatz eines spezifischen heparinabbauenden Enzyms (Heparinase 1) gelingt eine einfache und schnelle enzymatische Depolymerisierung von sowohl unfraktionierten als auch niedermolekularen Heparinen.

Bei insgesamt 34 Gesunden wurden die aPTT vor und nach Behandlung mit Heparinase gemessen. Der Mittelwert betrug vor Heparinase 25,6 und nach Heparinase 25,2 sec. Offensichtlich wird lediglich das Heparin abgebaut, ohne daß es zum Verlust von Gerinnungsfaktoren kommt. Die Analyse der Einzelfaktoren in einem Plasmapool zeigte praktisch identische Werte vor und nach der Enzymbehandlung. Auch die Thromboplastinzeit wird durch das enzymatische Verfahren nicht verändert. Nach Zusatz von verschiedenen Heparinen zu Plasma wurde durch Heparinasebehandlung nahezu der Ausgangswert der aPTT wieder erreicht, solange die Konzentration unter 2 E/ml lag.

Diese Ergebnisse zeigen, daß die enzymatische Behandlung mit Heparinase 1 ein einfaches und spezifisches Verfahren zur. Entfernung von Heparin darstellt.

Schlüsselwörter

Heparin - Heparinase - extrakorporaler Kreislauf - Antikoagulation - Gerinnungstest - Lupusantikoagulans

• LITERATUR

• 1 Harenberg J. Klinische Pharmakologie von Heparinen. Hämostaseologie 1992; 12: 23.
• 2 Hirsh J. Heparin. N Engl J Med 1991; 324: 1565.
• 3 Béguin S, Lindhout T, Hemker HC. The mode of action of heparin in plasma. Thromb Haemost 1988; 60: 457-62.
• 4 Solleder EM, Mayer J, Schwenk B, Kolde H-J, Simmoteit R, Keller F. Technical problems in thrombin clotting time analysis. Ann Haematol 1992; 64 (Suppl): A 19
• 5 Lindhoff-Last E, Krzywanek HJ, Mosch G, Breddin HK. A comparison of different aPTT-reagents, heparin-sensitivity and detection of mild coagulopathies. Lab med 1992; 16: 423-6.
• 6 Schultz NJ, Slaker RA, Rosborough TK. The influence of heparin on the prothrombin time. Pharmacotherapy 1991; 11: 312-6.
• 7 Hellstern P, Anders CU, Oberfrank K, Faller B, Spaett A. Heparinsensitivität von Thromboplastinen zur Bestimmung der Thromboplastinzeit. Klin Lab 1992; 38: 183-8.
• 8 Kolde H-J, Hawkins P, Tejidor L, Denzler B, Ramirez I. Eigenschaften eines neuen Thromboplastins auf der Basis von rekombinantem Tissue Factor und synthetischen Phospholipiden. Klin Lab 1993; 39: 511-21.
• 9 Hoffmann JJML, Meulendijk PN. Evaluation of a heparin neutralizer. Thromb Res 1980; 18: 897-900.
• 10 Schuler J, von Felten A. Eine einfache Methode zur Kontrolle der Antikoagulation mit Vitamin-K-Antagonisten unter Heparintherapie: Quick-Bestimmung nach Absorption des Heparins mittels ECTEO- LA-Cellulose. Schweiz Med Wochenschr 1982; 112: 1798-800.
• 11 Branson HE, Schottinger JE, Fagin AR, Puri SL, Roohk V. Trials of commercial reagents in anion-exchange coagulation procedures: Ortho Diagnostics. Am J Clin Path 1984; 82: 432-5.
• 12 Wenz B, Burns ER. Rapid removal of heparin from plasma by affinity filtration. Am J Clin Path 1991; 96: 385-90.
• 13 Cumming AM, Jones GR, Wensky RT, Cundell RB. In vitro neutralization of heparin in plasma prior to the activated partial thromboplastin test: An assessment of four heparin antagonists and two anion exchange resins. Thromb Res 1986; 41: 43-56.
• 14 Michalski R, Lane DA, Pepper DI, Kakkar W. Neutralization of heparin in plasma by platelet factor 4 and protamine sulphate. Br J Haematol 1978; 38: 561-71.
• 15 Linhardt RJ, Turnbull JE, Wang HM, Loganthan D, Gallagher JT. Examination of the substrate specificity of heparin and heparin sulfate lyases. Biochemistry 1990; 29: 2611-7.
• 16 Zimmermann JJ. et al. The Release of heparinase from the periplasmic space of flavobacterium heparinum by three-step osmotic shock. App Biochem Biotech 1991; 30: 137-48.
• 17 Hutt ED, Kingdon HS. Use of heparinase to eliminate heparin inhibition in routine coagulation assays. J Lab Clin Med 1972; 79: 1027-1034.
• 18 Tejidor L, Pelzer H. et al. Enzymatischer Abbau von Heparin in einem gebrauchsfertigen Heparinasereagenz (Poster). Klin Lab 1993; 39: 409-12.
• 19 Prohaska W. Untersuchungen über den Einfluß der Ionenstärke im Testansatz auf die Heparinempfindlichkeit der Thrombinzeit. Bedeutung für die Überwachung der Heparintherapie. Ärztl Lab 1987; 33: 99-105.
• 20 Sandset PM, Abildgaard U, Larson ML. Heparin induces release of extrinsic pathway inhibitor (EPI). Thromb Res 1988; 50: 803-13.
• 21 Nordfang O, Kristensen HJ, Valentin S, Ostergaard P, Wadt J. The significance of TFPI in clotting assays – comparison and combination with other anticoagulants. Thromb Haemost 1993; 70: 448-53.
• 22 Linhardt RJ, Grant A, Corney CL, Langer R. Differential anticoagulant activity of heparin fragments prepared using microbial heparinase. J Biol Chem 1982; 257: 7310-3.
• 23 Barthels M, Poliwoda H. Gerinnungsanalysen, 4. Aufl. Stuttgart, New York: Thieme; 1993
• 24 Harenberg J, Hish J. et al. Manuskript in Vorbereitung.
• 25 Van den Besselaar AMHP, Meeuwisse-Braun J, Bertina RM. Monitoring heparin therapy. Relationships between the activated partial thromboplastin time and heparin based on ex-vivo samples. Thromb Haemost 1990; 63: 16-23.
• 26 Waagenvoord RJ, Hendrix HH, Kolde H-J, Hemker HC. Development of a rapid and sensitive chromogenic heparin assay for clinical use. Haemostasis 1993; 23: 26-37.
• 27 Kolde H-J, Stecher-Schilling A. Unpublizierte Ergebnisse..
• 28 Keller F, Kolde H-J, Ramirez J. Evaluierung eines neuartigen Thromboplastins auf der Basis von rekombinantem humanen Tissue Factor und synthetischen Phospholipiden. Lab med 1993; 17: 523-32.
• 29 Van den Besselaar AMHP. Meeuwisse-Braun Enzymatic elimination of heparin from plasma for activated partial thromboplastin and prothrombin testing. Blood Coagulation and Fibrinolysis 1993; 04: 635-8.
• 30 Baugh RF, Deemas KA, Zimmermann JJ. Heparinase in the activated clotting time assay: Monitoring heparin induced alterations in coagulation function. Anesthesia and Analgesia 1982; 74: 201-5.
• 31 Kolde H-J, Spannagl M, Dietrich W. Unpublizierte Ergebnisse..
• 32 Arnoud J, Vanrusselt M, Huybrecht E, Vermylen J. Optimisation of the dilute prothrombin time for the detection of the lupus anticoagulant by use of a recombinant human tissue thromboplastin. Thromb Haemost 1993; 69: 1222.
• 33 Zanon E, Simioni P, Saracino M, Scarano J, Girolami B, Girolami A. Recombinant thromboplastin (innovin) inhibition assay for the detection of lupus anticoagulant. Thromb Haemost 1993; 69: 1220.
• 34 Connaghan GD, Francis CW, Ryan DH, Mandor VJ. Prevalence and Clinical complications of heparin-associated false positive Test for Serum fibrinogen degradation products. Am J Clin Pathol 1986; 86: 304-10.
• 35 Mannhalter C. Persönliche Mitteilung..
• 36 Lindhardt RJ, Tapper D, Klein M. An enzymatic system for removing heparin in extracorporal therapy. Science 1982; 217: 261-3.