V-182 Herstellung von tumorspezifischen T-Zellen für die individuelle Tumortherapie

Hintergrund

In einem seit 2015 laufenden Projekt gelang es erstmals, tumorspezifische T-Zellen in Lungenkarzinomen gerichtet zu identifizieren und deren Rezeptoren per Sequenzierung zu entschlüsseln. Es konnte klar verifiziert werden, dass diese T-Zellen in Zellkultur zu einem späteren Zeitpunkt durch Tumorzellen aktiviert werden. Um eine individuelle Immuntherapie entwickeln zu können, wird nun zusätzlich zur DNA Analyse der tumorspezifischen T-Zellen auch die den kompletten T-Zell-Rezeptor kodierende RNA per single-cell Sequenzierung analysiert.

Material und Methode

Nachdem mit Hilfe der DNA-Sequenzierung die tumorspezifischen T-Zellen gefunden wurden (quantitative Analyse), wird nun in einem 2. Schritt die single-cell RNA- Sequenzierung angeschlossen. So erst kann der komplette Bauplan (beide Ketten) des T-Zellrezeptors, der die entsprechenden Tumorantigene erkennt, entschlüsselt werden. Durch Klonierung werden diese T-Zell-Rezeptoren (TCR) dann in eine große Menge autologer T-Zellen transferiert, um therapeutische Dosen zu erhalten. Die endogenen TCR der autologen T-Zellen werden zuvor gentechnisch durch CRISPR/CAS9 ausgeschaltet. Die Tumorproben werden mit den gentechnisch produzierten T-Zellen inkubiert und deren Aktivierung durch Monitoring der IFN-γ Expression vermessen.

Ergebnis

Es ist möglich, die TCRs der tumorspezifischen T-Zellen per single-cell Sequenzierung vollständig zu bestimmen, sie danach zu synthetisieren und mittels Transfektionsvektor in aus peripherem Blut gewonnene T – Zellen einzuklonieren. Die angestrebte Immunreaktion dieser T-Zell-Klone konnte klar nachgeweisen werden: Bei mehreren Patientenproben wurde mittels IFN-γ ELISpot Assays gezeigt, dass die rekombinanten T-Zellen bei Ko-Inkubation mit autologen Tumorzellen spezifisch IFN-γ freisetzen.

Schlussfolgerung

Ausblick: Aktuell läuft die Einbringung der synthetisierten tumorspezifischen T Zellen in einem vitalen Tumormodell, um deren Aktivierung und Effektivität dann auch mittels Lethalitätsmessung zu zeigen. Erste Ergebnisse werden zum Kongress vorliegen.

Publication History

Article published online:
06 September 2021