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Klin Monbl Augenheilkd 2000; 217(6): 356-362
DOI: 10.1055/s-2000-9575
EXPERIMENTELLE STUDIE

Georg Thieme Verlag Stuttgart ·New York

Kultivierung von Iriszellen in vitro[1] [2]

Cultivation of iris cells in vitroEveline  G. Weimer1 , Jindrich Cínatl Jr2 , Jaroslaw Cínatl2 , Christian Ohrloff1 , Hansjürgen Bratzke3 , Hermann  O. C. Gümbel1
  • 1 Zentrum der Augenheilkunde des Klinikums der Johann Wolfgang Goethe-Universität, Frankfurt am Main (Dir.: Prof. Dr. C. Ohrloff)
  • 2 Institut für Medizinische Virologie des Klinikums der Johann Wolfgang Goethe-Universität, Frankfurt am Main (Dir.: Prof. Dr. H. W. Doerr)
  • 3 Zentrum der Rechtsmedizin des Klinikums der Johann Wolfgang Goethe-Universität, Frankfurt am Main (Dir.: Prof. Dr. H. Bratzke)
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Publication Date:
31 December 2000 (online)

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Zusammenfassung

Hintergrund Das biologische Verhalten von Iriszellen wurde in vitro bisher nicht abschließend erforscht. Zur genaueren Untersuchung der Kultivierungsfähigkeit von Iriszellen in vitro isolierten wir aus humanen Augen gewonnenes Irispigmentepithelium (IPE) und Irisfibroblasten.

Material und Methoden Zu diesem Untersuchungszweck wurden aus 19 Augenspenden Iriszellen isoliert. Die durch Pipette abgesaugten und isolierten IPE-Zellen wurden mittels Fibronectinbeschichtung und Anwendung eines besonderen Zellkulturmediums kultiviert. Außerdem wurde eine Methode zur Selektion der Fibroblasten aus Irisstroma (IS) in vitro im Wege der Fibronectinbeschichtung, Passagierung und Proliferierung in Zellkulturmedium entwickelt.

Ergebnisse Die IPE- und IS-Zellen konnten aus sämtlichen Entnahmen erfolgreich kultiviert werden. Die IPE-Zellen begannen im Durchschnitt nach 5,4 ± 0,7 Tagen in Kultur sich zu teilen. Die Teilung der IS-Zellen wurde im Durchschnitt nach 3,3 ± 0,87 Tagen in Kultur beobachtet. Ein konfluenter Zellrasen wurde bei IPE-Zellen nach 14,7 ± 4,92 Tagen und bei IS-Zellen nach 8,1 ± 1,45 Tagen erreicht. Die immunzytochemische Färbung mittels zweier Antikörper gegen Zytokeratin und einem Antikörper gegen humane Fibroblasten zeigte, dass es sich um eine reine IPE-Kultur handelte, und dass die IS-Kultur aus Fibroblasten bestand. Die elektronenmikroskopischen Aufnahmen der IPE- und IS-Kultur bestätigten die Ergebnisse der immunzytochemischen Färbung.

Schlussfolgerungen Die Isolierung und Kultivierung in vitro von aus Augenspenden gewonnenen IPE-Zellen und IS-Zellen lässt sich erfolgreich durchführen. Die kultivierten Zellen stellen ein geeignetes Modell für die In-vitro-Erforschung der Iris dar. Als Anwendungsfelder kommen Untersuchungen des Stoffwechsels der Iris oder von Erkrankungen der Iris in Betracht.

Background The biological behaviour of iris cells in vitro was not yet completely investigated. For a more detailed study of the scope of cultivation of iris cells in vitro we isolated human iris pigment epithelium (IPE) cells and iris fibroblasts.

Materials and Methods For the purpose of this study iris cells were isolated from 19 donor eyes. A method was established for isolation and cultivation of IPE cells by means of fibronectin coating and the use of a special cell culture medium. Additionally, a method was developed for the selection of fibroblasts from iris stroma (IS) in vitro by means of fibronectin coating, passaging and proliferation in cell culture medium.

Results The IPE and IS cells could be cultivated successfully. The IPE cells started to divide after a mean interval of 5.4 ± 0.7 days in culture. The mitosis of IS cells was observed after 3.3 ± 0.87 days in culture. Confluency of IPE cells was reached after 14.7 ± 4.92 days and by IS cells after 8.1 ± 1.45 days. Immunocytochemical staining using two antibodies for cytoceratin and one for human fibroblast showed that the IPE cell culture was pure and that the IS culture consisted of fibroblasts. Furthermore, electron microscopy of IPE and IS cultures confirmed the results of the immunocytochemical staining.

Conclusions The use of human IS and IPE cells in vitro has established a novel model for the research on iris cells. The model might possibly be applied in the research of metabolic structures and diseases of the iris.

Schlüsselwörter

Iriszellen - Kultivierung

Key words

iris cells - cell culture

1 Manuskript erstmalig eingereicht am 18. 3. 00 und in der vorliegenden Form angenommen am 2. 4. 00.

2 Herrn Prof. Dr. G. O. H. Naumann gewidmet.

Literatur

1 Manuskript erstmalig eingereicht am 18. 3. 00 und in der vorliegenden Form angenommen am 2. 4. 00.

2 Herrn Prof. Dr. G. O. H. Naumann gewidmet.

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